棕色脂肪源性干细胞向起搏样细胞的分化及其机制研究

发布时间：2021-04-24 10:31

　　生物起搏近年来已成为心脏起搏的研究热点。所谓生物起搏，就是利用具有起搏或传导功能的细胞、组织来替代病变或损伤的起搏和传导组织，重建心脏正常的起搏和传导功能。目前，实现生物起搏的主要策略有：基因治疗、干细胞移植和组织工程构建。从理论上讲，用再生医学的理念构建出生物起搏器不仅具有较高的安全性和自控性，并能克服电子起搏器的诸多缺陷，是未来治疗各型心律失常的理想选择和发展方向。种子细胞是生物起搏的关键环节之一，因此，研究干细胞向起搏细胞的分化及机制，寻找可用于替代移植的种子细胞，具有重要的理论和临床意义。目前，生物起搏研究领域中所用的种子细胞主要包括（1）成体细胞：窦房结细胞、幼稚心脏细胞及经基因修饰的心肌工作细胞；（2）全能干细胞：胚胎干细胞（embryonic stem cells, ES）和诱导性多能干细胞（induced pluripotent stem cells, iPS）；（3）成体多能干细胞（somatic multipotent stem cells, SMSC）,：来源于骨髓、脐带血、月经血、羊膜、脂肪等组织的间充质干细胞（mesenchymal stem cells, M... 

【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词对照表
前言
第一部分 棕色脂肪源性干细胞的生物学特性
    一、 前言
    二、 材料和设备
        （一） 实验动物
        （二） 主要实验试剂
        （三） 主要实验设备
    三、 方法
        （一） BASCs 的分离
        （二） 新鲜分离 BASCs 表面标志的检测
        （三） BASCs 三向分化能力的检测
        （四） BASCs 培养早期的细胞成分鉴定
        （五） 数据统计和分析
    四、 结果
        （一） 新鲜分离的 BASCs 的表面标志
        （二） BASCs 三向分化的检测
        （三） 培养早期 BASCs 的细胞组成
    五、 讨论
第二部分 棕色脂肪源性干细胞向起搏样细胞的分化
    一、 前言
    二、 材料和设备
        （一） 实验动物
        （二） 主要实验试剂
        （三） qPCR 引物和蛋白电泳主要溶液的配制
        （四） 主要仪器设备
    三、 方法
        （一） BASCs 的常规培养
        （二） BASCs 增殖曲线的绘制
        （三） qPCR 检测 SAN 细胞结构基因的表达
        （四） Western Blot 检测蛋白水平的表达情况
        （五） 免疫细胞化学染色
        （六） 透射电镜观察细胞超微结构
        （七） 细胞内胞浆钙瞬变测定
        （八） 细胞自发动作电位记录
        （九） 药理学功能检测
        （十） 数据统计
    四、 结果
        （一） BASCs 在分化过程中的形态学观察
        （二） SAN 细胞特异性结构基因在分化后 BASCs 中的表达检测
        （三） 分化后的 BASCs 钙瞬变检测
        （四） 分化后的 BASCs 电生理检测
        （五） 分化后的 BASCs 药理学功能检测
    五、 讨论
第三部分 TBX18 在 BASCS 向起搏样细胞分化中的作用
    一、 前言
    二、 实验材料和设备
        （一） 实验动物
        （二） 主要试剂
        （三） qPCR 引物和蛋白电泳主要溶液的配制
        （四） 主要仪器设备
    三、 方法
        （一） qPCR 检测 SAN 细胞分化相关转录因子的表达
        （二） Western Blot 检测蛋白水平的表达情况
        （三） BASCs 慢病毒转染实验
        （四） 细胞增殖活力检测
        （五） 免疫细胞化学染色
        （六） 数据统计
    四、 结果
        （一） BASCs 在分化中 SAN 细胞分化相关转录因子的表达
        （二） BASCs 在 Tbx18 被干扰后的分化改变
    五、 讨论
参考文献
全文小结
创新点和意义
研究不足及下一步工作
在读期间发表的论文
文献综述
    参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]寒冷刺激诱导大鼠棕色脂肪组织中的心脏干细胞增多[J]. 杨俊杰,刘志强,王海滨,刘剑锋,陈韵岱.  中国循环杂志. 2011(05)
[2]Mini-review:Plasticity of human menstrual blood stem cells derived from the endometrium[J]. Dennis XIANG,Julie ALLICKSON,Charlie XIANG.  Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2011(05)



本文编号：3157206