戊二醛聚合猪血红蛋白对大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤保护作用的研究

发布时间：2021-04-26 20:53

　　冠心病是由于冠状动脉阻塞造成的,血氧供应不足引起的心肌损伤的一类心脏疾病,严重性损伤会导致心肌急性缺血,甚至心肌梗死。导致病情严重的原因就是在缺血后不能及时的打开阻塞的动脉,错过了最佳恢复血氧供应的最佳时间。因此,尽快恢复心肌血流灌注是解决心脏疾病的根本方法。目前,临床上尽管使用药物溶栓、冠状动脉旁路移植术（CABG）、经皮冠状动脉介入术（PCI）进行治疗,但其在恢复血流供应很容易引起的心肌缺血再灌注（Ischemiay Reperfiision,I/R）损伤,加速了心肌细胞凋亡和促进了炎症因子、大量氧自由基的释放。因此临床上急需找到在短时间及时恢复氧供的药物进行治疗,为我们找到了新的研究方向。本课题采用戊二醛交联剂合成的聚合猪血红蛋白（pPolyHb）,不仅具有携氧、释氧能力,在组织中还可以有效的维持氧含量的稳定。在I/R发生过程中有效的实现快速供氧,发挥心肌保护作用。近期研究中表明PI3K-Akt信号通路在心肌缺血再灌注损伤过程中发挥保护作用。因此,本实验将进一步探讨pPolyHb在心肌缺血再灌注损伤的作用保护机制,研究pPolyHb是否通过PI3K-Akt信号通路发挥保护作用,以... 

【文章来源】：西北大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语表
第一章 引言
    1.1 心肌缺血再灌注损伤
        1.1.1 心肌缺血再灌注损伤的发生发展
        1.1.2 心肌缺血再灌注损伤的机制研究
        1.1.3 心肌缺血再灌注损伤的调控
    1.2 HBOCs的研究进展
        1.2.1 HBOCs的特点及分类
        1.2.2 pPolyHb
    1.3 线粒体自噬与I/R损伤
        1.3.1 线粒体自噬的保护作用
        1.3.2 线粒体自噬通路—PINKl/Parkin通路
        1.3.3 pPolyHb与线粒体自噬
    1.4 PI3K-Akt信号通路
        1.4.1 PI3K-Akt信号通路与细胞凋亡
        1.4.2 PI3K-Akt信号通路的保护作用
    1.5 本文研究的目的及意义
第二章 pPolyHb对心肌缺血再灌注损伤的影响
    2.1 引言
    2.2 实验材料与仪器
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 仪器设备
    2.3 实验方法
        2.3.1 H9C2大鼠心肌细胞培养
        2.3.2 构建H9C2心肌细胞缺氧复氧损伤模型
        2.3.3 培养观察H9C2大鼠心肌细胞状态
        2.3.4 H9C2细胞生存活力的检测
        2.3.5 乳酸脱氢酶（LDH）活性检测
        2.3.6 肌酸激酶（CK）活性检测
    2.4 结果分析
        2.4.1 H9C2心肌细胞形态改变
        2.4.2 检测H9C2细胞生存活力
        2.4.3 LDH活性检测结果
        2.4.4 肌酸激酶（CK）活性检测结果
    2.5 讨论
第三章 pPolyHb通过PI3K-Akt信号通路对缺血再灌注损伤的影响
    3.1 引言
    3.2 实验材料与仪器
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 仪器设备
    3.3 主要溶液配制
    3.4 实验方法
        3.4.1 实验分组
        3.4.2 AnnexinV-FITC检测细胞凋亡
        3.4.3 Westernblot检测凋亡相关蛋白和信号通路蛋白的表达
    3.5 结果分析
        3.5.1 AnnexinV-FITC/PI双染法检测各个实验组大鼠心肌细胞凋亡率
        3.5.2 Westernblotting检测蛋白Bax、Bcl-2蛋白的表达
        3.5.3 Westernblotting检测蛋白Caspase-3蛋白的表达
        3.5.4 检测各实验组总Akt蛋白,p-Akt蛋白的表达
    3.6 讨论
第四章 pPolyHb对心肌细胞缺血再灌注炎症因子及NF-κBp65表达的影响
    4.1 引言
    4.2 实验材料与仪器
        4.2.1 实验材料
        4.2.2 仪器设备
    4.3 实验方法
        4.3.1 ELISA方法测定炎症因子TNF-α,IL-1β和TGF-β表达
        4.3.2 Westernblot法检测NF-κB信号通路中P65蛋白表达
    4.4 结果分析
        4.4.1 pPolyHb对H9C2心肌细胞缺血再灌注损伤释放炎症因子的影响
        4.4.2 检测NF-κB信号通路中P-65蛋白表达
    4.5 讨论
第五章 pPolyHb诱导线粒体自噬机制研究
    5.1 引言
    5.2 实验材料与仪器
        5.2.1 实验材料
        5.2.2 仪器设备
    5.3 实验方法
        5.3.1 实验分组
        5.3.2 pPolyHb预处理对大鼠肌细胞中I/R诱导的线粒体自噬的影响
        5.3.3 线粒体自噬通路被抑制后p-Akt蛋白的表达
    5.4 结果分析
        5.4.1 pPolyHb复氧对I/R过程中H9C2心肌细胞自噬蛋白表达的影响
        5.4.2 线粒体自噬抑制后对细胞凋亡的影响
        5.4.3 线粒体自噬抑制后凋亡蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达结果
        5.4.4 线粒体自噬通路被抑制后p-Akt蛋白的表达结果
    5.5 讨论
结论
参考文献
攻读硕士学位期间取得的科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]GSK-3β参与神经精神疾病的研究进展[J]. 唐倩倩,郭小云,刘迪,曹君利.  中国药理学通报. 2014(09)
[2]中药防治心肌缺血再灌注损伤炎症反应作用机制研究概况[J]. 唐丹丽,刘寨华,隋宇,张华敏.  中医杂志. 2014(11)
[3]Ischemia/reperfusion injury and cardioprotective mechanisms:Role of mitochondria and reactive oxygen species[J]. Maria-Giulia Perrelli,Pasquale Pagliaro,Claudia Penna.  World Journal of Cardiology. 2011(06)
[4]PI3K/Akt/GSK-3β信号通路在肾小管上皮细胞缺血再灌注损伤中的调控作用及重组人红细胞生成素预保护效应[J]. 周文祥,杨永丽,杨晓,夏章晖,韩敏,聂祥智,徐翠玲.  华中科技大学学报(医学版). 2010(03)
[5]红细胞代用品研发现状和趋势的分析[J]. 李宁,吴卫星,宋斌.  中国输血杂志. 2007(04)
[6]红细胞代用品的研究进展[J]. 余明华,修瑞娟.  中国生物医学工程学报. 2007(02)

博士论文
[1]Pink1/Parkin介导的线粒体自噬在糖尿病心肌病中的作用[D]. 王佳兴.第四军医大学 2015

硕士论文
[1]失荅剌知丸对大鼠脑缺血再灌注损伤PI3-K/AKT信号通路的影响[D]. 王佩佩.宁夏医科大学 2014



本文编号：3162100