调节Notch-1信号系统对高糖诱导心肌细胞损伤的保护作用及机制

发布时间：2021-05-11 03:02

　　目的：1.观察高糖对H9c2心肌细胞增殖、凋亡及纤维化的影响。2.观察以Notch-1为靶点干预对高糖诱导的H9c2心肌细胞增殖、凋亡及纤维化的影响。3.探讨过表达Notch-1抑制高糖诱导的H9c2心肌细胞凋亡及纤维化的机制。方法：1.体外低糖正常培养H9c2细胞，再分别运用高糖、γ分泌肽酶抑制剂（DAPT）和Notch-1过表达慢病毒进行干预。2.实验分六组：①Control组：正常对照组，用5.5mmol/L低糖培养基培养H9c2细胞；②Mannitol组：甘露醇高渗对照组，用含33mmol/L甘露醇的培养基培养H9c2细胞；③High glucose组：阳性对照组，用含33mmol/L葡萄糖的培养基培养H9c2细胞；④DAPT组：用Notch-1特异性阻断剂γ分泌肽酶抑制剂（DAPT）干预H9c2细胞；⑤Notch-1组：感染Notch-1过表达病毒组；⑥GFP组：感染空载体慢病毒组。3.DAPT干预48h，慢病毒感染72h后，用CCK-8试剂盒检测各组H9c2细胞的增殖抑制率；应用Annexin V-FITC/PI双染色后流式细胞仪测各组H9c2细胞凋亡率并比较；同时应用qR... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
中英文缩略词表
第1章 引言
    1.1 Notch 信号通路简单概述以及在心脏中的作用
    1.2 PI3K/AKT 信号通路与心肌保护作用
    1.3 Notch-1 信号系统与 PI3K/AKT 通路相互整合参与心肌保护
    1.4 Notch-1 信号系统在心肌细胞纤维化中的作用
    1.5 以 PI3K/AKT 为切入点研究 Notch-1 信号系统对心肌损伤的保护作用及机制
第2章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞
        2.1.2 主要试剂及耗材
        2.1.3 主要仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 器材的灭菌、去 RNA 酶处理
        2.2.2 相关液体的配制
        2.2.3 大鼠胚胎心肌细胞株 H9c2 细胞的体外培养
        2.2.4 γ分泌肽酶抑制剂(DAPT)使用浓度的测定
        2.2.5 Notch-1 慢病毒感染 H9c2 细胞确定 MOI 值
        2.2.6 正式慢病毒感染实验
        2.2.7 CCK-8 检测各组 H9c2 细胞增殖的变化
        2.2.8 应用 Annexin V /PI 双染色后流式细胞仪测各组心肌细胞凋亡率并比较
        2.2.9 qRT-PCR 检测 DAPT 干预和 Notch-1 过表达慢病毒感染后各组H9c2 细胞 PI3K/AKT mRNA 的表达
        2.2.10 Western blot 检测 DAPT 干预和 Notch-1 过表达慢病毒感染后各组H9c2 细胞 Notch-1、P-PI3K/P-AKT、Bax、Bcl-2、α-sma、collagen I 蛋白的表达
    2.3 统计学分析
第3章 结果
    3.1 H9c2 细胞的生长特点
    3.2 不同浓度 DAPT 对 H9c2 心肌细胞增殖的影响
    3.3 空载体慢病毒感染 H9c2 细胞测 MOI 值结果
    3.4 Western blot 法测定各组细胞 Notch-1 蛋白的表达
    3.5 Notch-1对心肌细胞增殖的影响:CCK-8试剂盒检测各组H9c2细胞的增殖抑制率
    3.6 Notch-1 对心肌细胞凋亡的影响：
        3.6.1 Western blot 法测定各组细胞 Bax、Bcl-2 的表达
        3.6.2 应用 Annexin V-FITC/PI 双染色后流式细胞仪测各组 H9c2 心肌细胞凋亡率
    3.7 Notch-1 对心肌细胞纤维化反应的影响：Western blot 法测定各组H9c2 细胞中α-sma、collagen I 蛋白表达
    3.8 定量 RT-PCR 法测定各组细胞中 PI3K/AKT mRNA 含量并比较
    3.9 Western blot 法测定各组细胞 p-PI3K/p-AKT 蛋白的表达
第4章 讨论
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
致谢
参考文献
综述
    参考文献



本文编号：3180586