基于新一代测序筛选急性心肌梗死相关的血清外泌体miRNA差异表达谱

发布时间：2021-05-18 18:30

　　[目的]本研究通过使用新一代测序技术来获得急性心肌梗死血清外泌体的miRNAs差异表达谱,从中筛选出差异显著的miRNA;研究差异表达的miRNA在急性心肌梗死诊断中的作用;找出与其相关的靶基因,阐明其在急性心肌梗死中的作用。[方法]本研究收集急性心肌梗死患者20例和健康成年人20例外周血标本,提取外泌体RNA,Western blot检测外泌体标记CD63和CD81表达变化,运用新一代测序技术结合生物信息学分析获得急性心肌梗死患者血清外泌体的miRNA差异表达谱;使用RT-PCR对初筛差异外泌体miRNA进行验证;对二次筛选出的miRNA进行靶基因预测,信号通路分析,GO注释,揭示其作用于急性心肌梗死的可能机制。[结果]1.急性心肌梗死患者的体重指数高于对照组,急性心肌梗死患者的肌钙蛋白T（c Tn T）、肌红蛋白、肌酸激酶（CK）和肌酸激酶同工酶（CK-MB）在急性心肌梗死中的表达水平均高于正常体检者（P<0.05）。2.AMI患者和对照组的血清外泌体中,均可以检测到CD63,CD81表达,但检测不到内参β-actin的表达。AMI患者和白细对照组胞中CD63,CD81表达很... 

【文章来源】：南华大学湖南省

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
主要英文缩略词索引
第1章 前言
    1.1 急性心肌梗死(AMI)研究现状
    1.2 外泌体与心血管疾病的进展
    1.3 miRNA与心血管疾病
    1.4 新一代测序技术的应用
    1.5 研究内容和研究意义
第2章 材料与方法
    2.1 试剂与仪器
        2.1.1 主要试剂
        2.1.2 主要仪器和设备
    2.2 实验对象及临床资料
        2.2.1 急性心肌梗死研究对象纳入标准及来源
        2.2.2 研究对象知情同意书
    2.3 血液样本的采集与保存
        2.3.1 用于高通量二代测序检测血液样本的采集
        2.3.2 其他血液样本的采集
    2.4 外泌体RNA提取
        2.4.1 外泌体提取
        2.4.2 总RNA提取
        2.4.3 总RNA鉴定
    2.5 miRNA表达谱测序分析
    2.6 qRT-PCR检测
    2.7 Western blot
    2.8 所涉及到的相关数据库及生物信息学软件分析
    2.9 统计分析
第3章 结果
    3.1 急性心肌梗死(AMI)和正常人一般情况比较
    3.2 外泌体标记蛋白检测
    3.3 总RNA浓度测定
    3.4 AMI与健康人差异表达mi RNAs谱
    3.5 qRT-PCR验证二代测序结果
    3.6 miRNA所调控的靶基因信号通路分析
第4章 讨论
    4.1 AMI研究现状与存在问题
    4.2 AMI血清诊断标记物研究进展
    4.3 miRNA可作为AMI早期诊断的潜在标志物
    4.4 外泌体与AMI
    4.5 miR-1、miR-133a、miR-208a与AMI
    4.6 本研究不足之处
第5章 结论
参考文献
文献综述
    参考文献
附图
攻读学位期间的科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Stem cell-derived exosomes-an emerging tool for myocardial regeneration[J]. Erzsebet Lazar,Theodora Benedek,Szilamer Korodi,Nora Rat,Jocelyn Lo,Imre Benedek.  World Journal of Stem Cells. 2018(08)



本文编号：3194282