AMPKα介导黄连素抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的研究

发布时间：2021-06-14 09:23

　　目的:本实验主要目的是研究BBR在细胞水平抗缺氧/复氧损伤中的作用机制,并利用AMPKα的抑制剂Compound C,深入讨论BBR对抗心肌缺氧/复氧损伤的保护作用是否通过AMPKα蛋白介导。方法:在本实验中,以大鼠H9c2心肌细胞作为实验载体,通过体外心肌细胞缺氧/复氧（A/R）损伤模型模拟体内心肌缺血再灌注（I/R）损伤模型。实验随机分成4组,每组重复6次,具体分组如下:（1）正常组（Control组）;（2）A/R组;（3）20μM BBR+A/R组;（4）20μM BBR+1μM Compound C+A/R组。MTS法检测细胞存活率;分光光度法检测LDH活性;蛋白免疫印迹法（Western Blotting,WB）检测AMPKα蛋白的表达;DCFH-DA法检测心肌细胞内ROS水平;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法和TUNEL法检测细胞凋亡。结果:1.与A/R组比较,20μM BBR预处理大鼠H9c2心肌细胞可减少LDH释放,降低LDH活性,且差异具有统计学意义（P<0.01）,增加细胞存活率（P<0.01）;2.蛋白免疫印迹法实验结果表明,20μM BBR预... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：46 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
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第1章 引言
第2章 材料与方法
    2.1 实验细胞
    2.2 主要材料和试剂
    2.3 主要仪器和设备
    2.4 实验方法
        2.4.1 培养H9c2心肌细胞
        2.4.2 心肌缺氧/复氧(A/R)损伤模型的构建及分组
        2.4.3 MTS法检测H9c2心肌细胞存活率
        2.4.4 分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)的活性
        2.4.5 蛋白免疫印迹法(WesternBlotting)检测AMPKα蛋白的表达
        2.4.6 流式细胞仪检测H9c2心肌细胞内ROS的生成情况
        2.4.7 AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测H9c2心肌细胞凋亡
        2.4.8 TUNEL法检测H9c2心肌细胞凋亡
        2.4.9 数据处理
第3章 实验结果
    3.1 BBR预处理对心肌细胞A/R损伤的保护作用
        3.1.1 BBR预处理对细胞存活率的影响
        3.1.2 BBR预处理对LDH活性的影响
    3.2 BBR预处理对AMPKα蛋白表达的影响
    3.3 BBR预处理对ROS生成的影响
    3.4 BBR预处理对细胞凋亡的影响
第4章 讨论
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
致谢
参考文献
综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]中药材黄连的研究现状与展望[J]. 赵楠,李隆云,白志川.  重庆理工大学学报(自然科学). 2015(01)



本文编号：3229535