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磁性免疫层析试纸条同时定量检测心梗三项的应用研究

发布时间:2021-06-19 09:36
  研究背景急性心肌梗死(Acute myocardial infarction,AMI),是一种以急性冠状动脉持续性缺血导致心肌细胞坏死为病理基础,发病迅速,病死率高,预后差,严重危及生命的临床急症。心梗三项标记物(心肌肌钙蛋白I、肌酸激酶同工酶MB和肌红蛋白)作为早期血清学指标,对于AMI的诊断有重大意义。传统的生物标记物检测方法,如酶联免疫吸附或电化学发光等检测方法虽然具有很高的灵敏度,但需配备大型的精密检测设备和较长的检测时间,且设备操作方法繁琐。而基于床旁检测技术的免疫层析检测(ICT,immunochromatographytest)方法由于便携、快速、精确、操作简单等优点在基层以及急诊中广泛应用。该方法中商业化最为成熟的是荧光免疫层析检测,但由于荧光信号存在背景高、光干扰、荧光猝灭等缺点一直限制其进一步应用。近段时间,基于磁性纳米珠(MNBs,magnetic nanobeads)的ICT技术因具有高信噪比、大抗体偶联总表面积、磁信号稳定等优点被国内外学者看好,拥有广阔的应用前景。方法与目的本研究采用MNBs与捕获单克隆抗体偶联构建针对心肌肌钙蛋白I(cTnl,cardiac... 

【文章来源】:南方医科大学广东省

【文章页数】:77 页

【学位级别】:硕士

【部分图文】:

磁性免疫层析试纸条同时定量检测心梗三项的应用研究


图2-2偶联前后磁珠的水合粒径图(A)和Zeta电位图(B)??Figure?2-2?(A)?Dynamic?light?scattering?(DLS)?result?of?free?MNBs?and?three?probes??(B)Zeaotentiaof?free?MNBs?and?threerobes??

分布情况,磁珠,偶联,紫外光谱图


?Bckmb??難:l?■■■??图2-2偶联前后磁珠的水合粒径图(A)和Zeta电位图(B)??Figure?2-2?(A)?Dynamic?light?scattering?(DLS)?result?of?free?MNBs?and?three?probes??(B)?Zeta?potential?of?free?MNBs?and?three?probes??对应的粒度仪动态光散射检测结果显示(图A),裸磁珠的水合动力直径平??均为198?nm。裸磁珠偶联cTnl、CKMB和Myo抗体后,其平均直径分别增加到??285?nm、278?nm和334?nm,且粒径的分布情况在偶联前后基本保持一致,说明??在偶联过程中磁珠粒没有出现大范围内聚集或溶解的现象。增加的水合粒径主??要是偶联的抗体在水溶液中呈伸展状态,因此水合粒径明显增大。图B显示裸??磁珠的Zeta电位为-39?mV,说明裸的磁珠在纯水溶液中有中等强度的分散性和??稳定性。如图3所示,偶联了不同抗体后的不同探针Zeta电位分别降至-24.?1?mV??(cTnl),-14.?5?mV?(CKMB),-10.7?mV?(Myo),表明抗体成功占领了磁珠表面??的羧基位点。由于表面有抗体的包裹

标准曲线,偶联效率,检测标准,探针


Figure?2-4?Calibration?curve?of?BCA?kit?test?and?the?conjugated?antibodies?effect?of??probes??以标准蛋白浓度(mg/mL)为横坐标,标准蛋白吸光值为纵坐标绘制BCA??白定量检测标准曲线,右侧纵坐标轴表示每毫克磁珠所能偶联的抗体量,其??算公式为:??.t.WWEBHY本加入抗体量-上清液抗体量innn/??抗体偶联率=?,^?a?X?1?〇〇%??加入抗体量??以上实验每组做三次,以平均值土标准差的结果表示。如图2-4所示,测得??吸光值与标准牛血清蛋白浓度之间存在线性关系,关系公式为:Y=?2.1886?X?+??.000017,?R2?=?0.9989,拟合度良好。对应的cTnL?CKMB、Myo探针的抗体偶??量为:41.53?±6.08吗,24.10?±4.73叩,47.90?±4.24?|ig;对应的偶联率分别??:69.22?±8.46%,48.21?±9.47%,47.90?±4.24%。三种抗体的偶联率偏差均??于10%,说明本研究提出的偶联方案有较好的偶联稳定性及重复性,有利于??业生。CKMBMo50,cTnl,??

【参考文献】:
期刊论文
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本文编号:3237565

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