IFI35通过抑制NF-κB信号通路调节血管内皮细胞功能以及血管损伤后的再内皮化
发布时间：2021-06-23 06:43
研究背景和目的血管内皮细胞是心血管系统的屏障和重要组成部分,在血管功能的调节以及稳态的维持中发挥了重要作用。各种原因导致血管内膜损伤后（如球囊扩张或冠状动脉内支架植入术后）,内皮细胞增殖、迁移修复受损部位,或者称为再内皮化的过程,在血管内膜增生和动脉粥样硬化的发生发展中起到了重要作用。因此,研究血管损伤后内皮细胞的修复机制以及更有效地促进血管内膜的再内皮化具有重要意义。IFI3 5（Interferon-induced protein 3 5,干扰素诱导蛋白3 5）是一种干扰素诱导蛋白,在免疫炎症反应中发挥了重要的作用。本研究的目的是探索IFI35是否可以影响内皮细胞增殖、迁移以及血管内膜的再内皮化。研究方法本研究中,我们首先通过过表达或者抑制IFI35之后,检测人原代脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）的增殖和迁移速度,观察IFI35对内皮细胞增殖和迁移的影响。其次,通过缺失IFI35的不同结构域以及双荧光素酶报告实验等,研究IFI35对于NF-κB/p65信号通路的影响,探索其潜在的作用机制。最后,通过建立小鼠...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：111 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．转染过表达腺病毒和敲低ｓｉＲＮＡ效率验证
染ＩＦＩ３５过表达腺病毒（Ａｄ－ＩＦＩ３５?）及其对照腺病毒（Ａｄ－ＲＦＰ?）、ＩＦＩ３５敲低ｓｉＲＮＡ??（ｓｉＲＮＡ－ＩＦＩ３５?）及其对照ｓｉＲＮＡ?（ｓｉ－ＮＣ?）?４８小时之后，进行ＣＣＫ－８和Ｅｄｕ细??胞增殖检测。如图２和图３所示，在内皮细胞中升高ＩＦＩ３５的表达可以明显抑制??内皮细胞的增殖，相反，在抑制ＩＦＩ３５表达之后可以观察到内皮细胞的增殖能力??明显升高。??０．５－｜?Ｉ￣＊￣．??０．４－?｜??Ｉ〇－３－?＾??■??０．１－?ｊ－＝ａ＝－ｊ?■??ｏ?丄Ｌ，．ｆｆ?—ｆ??３??图２．ＣＣＫ－８细胞增殖实验检测过表达或者敲低ＩＦＩ３５后对内皮细胞增殖能力??的影响＾?内皮细胞转染?Ａｄ－ＩＦＩ３５，?Ａｄ－ＲＦＰ，?ｓｉＲＮＡ－ＩＦＩ３５?以及?ｓｉ－ＮＣ４８ｈ?后，??进行ＣＣＫ－８细胞增殖实验，在酶标仪上测定４５０?ｎｍ处的吸光度。统计数据来??自于三次独立实验，并以均数土标准误（ｍｅａｎ±ＳＥＭ）表示，＊Ｐ＜０．０５。??Ａｄ－ＲＦＰ?Ａｄ－ＩＦＩ３５?ｓｉ＾Ｃ?ｓｉ＞ｌＲ３５?＊??－ＢＨＨＨ?ｉ?ｒＴ?ｉ??ＩＨＢ?ＩＢＭ?４〇－?■??■■■■??Ｈ■■圓?ｌｉ?１１?１１?１｜??ＩＨＢ?ＩＨＩＨ?Ａｄ－ＲＦＰ?ＭＡＦ＼３５?ｓ＾ＨＣ?ｓｉ－ＩＲ３５??图３．Ｅｄｕ细胞增殖染色检测过表达或者敲低ＩＦＩ３５后对内皮细胞增殖能力的影??响。内皮细胞转染?Ａｄ－ＩＦＩ３５，?Ａｄ－ＲＦＰ，?ｓｉＲＮＡ－ＩＦＩ３５?以及?ｓｉ－ＮＣ４８ｈ?后，进行?Ｅｄｕ??细胞增殖染色。Ｅｄｕ绿色荧光标示处于增殖状态的细胞
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【参考文献】：
期刊论文
[1]《中国心血管病报告2016》概要[J]. 陈伟伟,高润霖,刘力生,朱曼璐,王文,王拥军,吴兆苏,李惠君,顾东风,杨跃进,郑哲,蒋立新,胡盛寿. 中国循环杂志. 2017(06)
本文编号：3244452
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：111 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．转染过表达腺病毒和敲低ｓｉＲＮＡ效率验证
染ＩＦＩ３５过表达腺病毒（Ａｄ－ＩＦＩ３５?）及其对照腺病毒（Ａｄ－ＲＦＰ?）、ＩＦＩ３５敲低ｓｉＲＮＡ??（ｓｉＲＮＡ－ＩＦＩ３５?）及其对照ｓｉＲＮＡ?（ｓｉ－ＮＣ?）?４８小时之后，进行ＣＣＫ－８和Ｅｄｕ细??胞增殖检测。如图２和图３所示，在内皮细胞中升高ＩＦＩ３５的表达可以明显抑制??内皮细胞的增殖，相反，在抑制ＩＦＩ３５表达之后可以观察到内皮细胞的增殖能力??明显升高。??０．５－｜?Ｉ￣＊￣．??０．４－?｜??Ｉ〇－３－?＾??■??０．１－?ｊ－＝ａ＝－ｊ?■??ｏ?丄Ｌ，．ｆｆ?—ｆ??３??图２．ＣＣＫ－８细胞增殖实验检测过表达或者敲低ＩＦＩ３５后对内皮细胞增殖能力??的影响＾?内皮细胞转染?Ａｄ－ＩＦＩ３５，?Ａｄ－ＲＦＰ，?ｓｉＲＮＡ－ＩＦＩ３５?以及?ｓｉ－ＮＣ４８ｈ?后，??进行ＣＣＫ－８细胞增殖实验，在酶标仪上测定４５０?ｎｍ处的吸光度。统计数据来??自于三次独立实验，并以均数土标准误（ｍｅａｎ±ＳＥＭ）表示，＊Ｐ＜０．０５。??Ａｄ－ＲＦＰ?Ａｄ－ＩＦＩ３５?ｓｉ＾Ｃ?ｓｉ＞ｌＲ３５?＊??－ＢＨＨＨ?ｉ?ｒＴ?ｉ??ＩＨＢ?ＩＢＭ?４〇－?■??■■■■??Ｈ■■圓?ｌｉ?１１?１１?１｜??ＩＨＢ?ＩＨＩＨ?Ａｄ－ＲＦＰ?ＭＡＦ＼３５?ｓ＾ＨＣ?ｓｉ－ＩＲ３５??图３．Ｅｄｕ细胞增殖染色检测过表达或者敲低ＩＦＩ３５后对内皮细胞增殖能力的影??响。内皮细胞转染?Ａｄ－ＩＦＩ３５，?Ａｄ－ＲＦＰ，?ｓｉＲＮＡ－ＩＦＩ３５?以及?ｓｉ－ＮＣ４８ｈ?后，进行?Ｅｄｕ??细胞增殖染色。Ｅｄｕ绿色荧光标示处于增殖状态的细胞
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【参考文献】：
期刊论文
[1]《中国心血管病报告2016》概要[J]. 陈伟伟,高润霖,刘力生,朱曼璐,王文,王拥军,吴兆苏,李惠君,顾东风,杨跃进,郑哲,蒋立新,胡盛寿. 中国循环杂志. 2017(06)
本文编号：3244452
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