抗体滴定在血液细胞流式细胞术中的应用

发布时间：2021-06-29 12:54

　　流式细胞术（flow cytometry）可以实现高速、逐一的细胞定量分析和分选,是研究和诊断血液病的重要手段之一。但是由于不同实验所用细胞和实验条件不同,经常存在抗原阴性细胞非特异染色等问题。利用抗体滴定法,可通过计算、比较染色指数,得到使抗原阳性细胞群和阴性细胞群达到最佳分离效果的实验条件。为了优化血液细胞流式细胞术中荧光抗体染色的实验条件,以小鼠骨髓细胞为被标记细胞,选择利用非串联荧光染料FITC标记的大鼠抗小鼠CD11b抗体（FITC Rat Anti-Mouse CD11b）和串联荧光染料APC-eFluor780标记的大鼠抗小鼠CD11b抗体（APC-eFluor780 Rat Anti-Mouse CD11b）进行标记。通过计算不同浓度抗体标记小鼠骨髓细胞的染色指数进行抗体滴定,确定合适的抗体浓度区间,进而分析细胞数量、染色时间及固定步骤对抗体染色指数的影响,探究影响血液细胞抗体染色的关键因素。结果显示,FITC Rat Anti-Mouse CD11b和APC-eFluor780 Rat Anti-Mouse CD11b的浓度分别在0.156～2.500μg·mL

【文章来源】：生物技术进展. 2020,10(03)

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

抗体浓度对抗体染色指数的影响

可见即使是针对同一抗原表位的不同抗体,进行样品标记的合适的细胞数量范围也不尽一致。如本实验中,非串联荧光染料标记的抗体在一定范围内细胞数量的改变不会对染色效果有明显的影响,而串联荧光染料标记的抗体则对细胞数增加更为敏感。总之,无论是何种抗体,如果进行较多数量的细胞染色(如进行细胞分选),有必要对合适的抗体浓度重新进行滴定,以免影响染色效果。2.3 染色时间对抗体染色效果的影响

虽然染色后的新鲜标本立即进行流式细胞分析最为理想,但是有时受实验安排及仪器所限,需要对样本进行PFA固定后次日再进行分析。为了研究PFA固定步骤对细胞染色效果的影响,在细胞数量(1×106 cells·管-1)、抗体浓度(1.25 μg·mL-1)和染色时间(30 min)不变的情况下,比较了FITC Rat Anti-Mouse CD11b和APC-eFluor780 Rat Anti-Mouse CD11b抗体在PFA固定前后染色指数的变化。如图4所示,FITC Rat Anti-Mouse CD11b抗体染色经2% PFA固定24 h后,染色指数从25.34降为9.91,可见固定前后的染色效果显著下降(P<0.01)。APC-eFluor780 Rat Anti-Mouse CD11b抗体染色经2% PFA固定24 h后,染色指数从38.81降为24.86,固定步骤使染色效果显著下降(P<0.05)。可见,PFA溶液固定会使非串联荧光染料与串联荧光染料抗体染色效果均显著下降。3 讨论

【参考文献】：
期刊论文
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[2]三种荧光色素标记的CD4抗体在流式细胞术研究T辅助细胞中的有效性评价[J]. 郑翠玲,韩晓红.  标记免疫分析与临床. 2011(04)
[3]以流式细胞术建立中国汉族健康儿童外周血淋巴细胞亚群相对计数的正常参考值[J]. 肖婧,申丹,刘永革,张新根,孙琳,吴喜蓉,焦伟伟,冯卫星,苗青,顾艺,刘芳,张桂荣,申阿东.  中国循证儿科杂志. 2010(04)



本文编号：3256483