miR-327调控凋亡抑制因子ARC在心肌缺血再灌注损伤中的作用及机制研究

发布时间：2021-07-14 21:56

　　目的:凋亡反应是心肌缺血再灌注损伤（MI/RI）的关键环节,抑制心肌细胞凋亡可有效减轻MI/RI,本实验拟通过mi R-327重组腺病毒载体转染H9C2心肌细胞与大鼠心肌组织,研究mi R-327对MI/RI诱导的心肌细胞凋亡的作用,并进一步探讨其通过调控凋亡抑制因子（ARC）等相关信号通路对MI/RI的影响,为防治MI/RI提供理论依据和新的治疗靶点。方法:（1）细胞实验:培养H9C2大鼠心肌细胞,随机分成5组:空白对照组（control组）,缺氧复氧组（H/R组）、腺病毒空载组（Ad-EGFP-NC+H/R,Ad-NC组）、mi R-327上调组（Ad-mi R-327+H/R,Ad-mi R-327组）、mi R-327下调组（Ad-mi R-327-RNAi+H/R,Ad-mi R-327i组）。将重组腺病毒载体转染H9C2心肌细胞48 h后,建立心肌缺氧复氧（H/R）损伤模型（缺氧4 h,复氧12 h）。采用荧光显微镜和流式细胞仪测定腺病毒转染效率;CCK-8法检测细胞存活率;全自动生化分析仪检测培养液中乳酸脱氢酶（LDH）释放水平;流式细胞仪检测凋亡率;实时荧光定量PCR（... 

【文章来源】：三峡大学湖北省

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

缺氧复氧刺激后H9C2细胞miR-327及ARC表达变化

将Ad-miR-327按不同MOI值转染至H9C2细胞48 h后胞浆中出现绿色荧光蛋白的表达,流式细胞仪上可见相应的峰值及阳性百分比(图3A)。结果提示,随着MOI值上升,GFP表达增多,MOI=50时转染效率为86.46%,与MOI=25相比,其转染效率显著提高(P<0.05)(图3B)。同时采用CCK-8检测不同MOI值下心肌细胞存活率,进而确认腺病毒转染H9C2细胞的最佳MOI值。如图3C所示,与MOI=0相比,MOI=100和MOI=150其细胞存活率明显下降(P<0.05)。因此,选择MOI=50作为最佳感染复数。1.3 miR-327 下调可抑制 H/R 诱导的心肌细胞损伤及凋亡

此外,流式细胞术以及Western blot检测cleaved Caspase-3表达结果提示(图4D-E),H/R刺激可明显增加心肌细胞凋亡以及cleaved Caspase-3表达。与Ad-NC组相比,Ad-miR-327i组凋亡细胞数与cleaved Caspase-3表达明显减少,而Ad-miR-327组凋亡细胞数与cleaved Caspase-3表达明显增加(P<0.05)。上述指标中,Ad-NC组与H/R相比均无明显差异(P>0.05)。以上结果提示,miR-327下调可抑制H/R诱导的心肌细胞损伤及凋亡反应。1.4 miR-327 下调可抑制 H/R 诱导的心肌细胞凋亡级联反应

【参考文献】：
期刊论文
[1]含胱天蛋白酶富集功能域凋亡抑制因子在心血管疾病中的研究进展[J]. 李奇,杨俊,杨简,杨英.  中国医学科学院学报. 2019(04)
[2]《中国心血管病报告2017》概要[J]. 陈伟伟,高润霖,刘力生,朱曼璐,王文,王拥军,吴兆苏,李惠君,顾东风,杨跃进,郑哲,蒋立新,胡盛寿.  中国循环杂志. 2018(01)
[3]胱天蛋白酶募集域蛋白家族在心血管疾病中的作用研究进展[J]. 曹一得,李良鹏,陈鑫.  中国循环杂志. 2017(10)
[4]带有caspase富集功能域的凋亡抑制因子对急性病毒性心肌炎小鼠心肌的保护作用[J]. 汤道文,程景林,戚金威.  安徽医学. 2017(06)
[5]高血压诱导大鼠心肌肥大过程中Caspase募集域的凋亡抑制蛋白表达水平的变化[J]. 万帝,钱令嘉,王新兴,梅竹松,刘伟丽,袁聚祥.  中国心血管杂志. 2011(06)

硕士论文
[1]ARC蛋白对胰岛素诱发的肉鸡心肌细胞肥大c-myc基因表达的影响[D]. 赵靖.华中农业大学 2013



本文编号：3284968