ARC蛋白通过14-3-3ε/YAP信号通路调控血管平滑肌细胞的增殖迁移和表型转换

发布时间：2021-07-15 14:43

　　目的血管平滑肌细胞的异常增殖、迁移和表型转换是动脉粥样硬化的主要发病基础,研究其分子机制可以揭示动脉粥样硬化发病机制,发现新的治疗靶点。在血管受到损伤过程中,血管平滑肌细胞（Vascular smooth muscle cell,VSMC）从收缩表型转变为合成表型,VSMC的过度增殖和迁移,导致新生内膜的形成。ARC（Apoptosis repressor with caspase recruitment domain）是一种内源性凋亡抑制蛋白,在心肌细胞中表达较高,发挥心肌保护作用。ARC是否在VSMC中发挥作用、参与动脉粥样硬化的发生、发展尚不清楚。本课题将研究ARC在VSMC中的表达水平,是否参与VSMC增殖、迁移及表型转换,并揭示其下游调控机制。方法分别采用Western blot和实时荧光定量PCR检测ARC、YAP（Yes associated protein）和14-3-3ε的蛋白水平和mRNA水平;利用免疫组化检测ARC在人正常血管组织和动脉粥样硬化患者血管组织中的表达差异。采用CCK-8（Cell Counting Kit-8）和EdU实验分析VSMC的增殖情况,Tr... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

动脉粥样硬化的形成过程[6]

结果17图1ARC在VSMC中表达且在血管损伤后表达上调（A，B）通过Westernblot和qRT-PCR检测小鼠心脏、主动脉、肾脏、骨骼肌和肝脏中的ARC蛋白水平（A）和mRNA（B）水平；（C）通过Westernblot检测H9c2、VSMC、HAEC和HUVEC中的ARC蛋白水平；（D）免疫组织化学检测ARC在动脉粥样硬化病人斑块与健康组中表达变化；Bar=20μm；AS：动脉粥样硬化斑块；右侧的柱形图统计了ARC的相对蛋白质水平；（E，F）通过Westernblot和qRT-PCR检测人的动脉粥样硬化斑块组织中的ARC蛋白水平（E）和mRNA水平（F），其中有8个动脉粥样硬化斑块组和6个对照组；（G，H）通过Westernblot和qRT-PCR检测大鼠颈动脉球囊损伤模型中的ARC蛋白水平（G）和ARCmRNA水平（H）；（I，J）通过Westernblot和qRT-PCR检测动脉粥样硬化小鼠主动脉组织中中的（I）ARC蛋白水平和（J）mRNA水平。数据显示为Mean±SEM（n=3）；*p<0.052ARC促进VSMC的增殖和迁移VSMC的增殖和迁移在新内膜形成和发展中发挥关键作用。最近的研究表明，敲除ARC的小鼠降低了肺动脉高压，同时降低了PASMC的增殖[22]。为了检测ARC是否参与VSMC的增殖和迁移，我们首先使用ARCsiRNA腺病毒抑制VSMC中内源性ARC的表达。从图2A可以看出，VSMC感染ARCsiRNA腺病毒24小时后，内源性ARC的表达水平显著降低。与对照组相比，内源性的ARC被抑制后，EdU和CCK-8实验结果显示VSMC的增殖能力减弱（图2B和C）。Transwell实验结果表明内源性ARC被抑制后会减弱VSMC的迁移（图2D）。随后，我们通过用过表达ARC的腺病毒转染VSMC细胞，发现腺病毒可以有效地在VSMC中过表达ARC

青岛大学硕士学位论文18（图2E）。而且，ARC的过表达会促进VSMC的增殖（图2F和G）和迁移（图2H）。以上结果表明ARC在VSMC中发挥促进VSMC的增殖和迁移的功能。图2ARC促进VSMC的增殖和迁移（A）通过Westernblot检测ARC-siRNA腺病毒转染VSMC24h后ARC的蛋白水平；（B）通过CCK-8检测在0、12、24、36和48h转染ARC-siRNA腺病毒的VSMC的增殖情况；（C）


本文编号：3285908