心脏干细胞源exosomes传递circHIPK3修复梗死后心肌及血管的实验研究

发布时间：2021-07-16 19:12

　　研究背景及目的:干细胞移植治疗急性心肌梗死（Acute myocardial infarction,AMI）已成为全球研究的新趋势。心脏干细胞（Cardiac Stem Cells,CSCs）具有再生修复梗死心肌,促进新生血管形成,从而降低心肌梗死后梗死面积,改善梗死区域微循环作用,因此被认为在治疗MI方面具有强大的潜力。然而,CSCs移植治疗MI仍遇到一些瓶颈问题,即CSCs移植至心肌梗死后恶劣微环境中干细胞存活力极低,分化增殖能力受抑制,不能有效的达到受损心肌再生修复的作用,因此目前认为CSCs主要通过旁分泌机制,改善局部心肌梗死微环境,促进心肌细胞存活及局部血管新生发挥作用。外泌体（Exosomes）是纳米级的膜性封闭囊泡,其内包含多种蛋白质和核酸,成为细胞间传递信息的关键中介,而外泌体主要通过非编码RNAs发挥效应,其中circRNAs因具有更好保守性,成为目前研究的热点。随着研究的深入,近来发现circRNAs中circHIPK3具有心脏保护及再生新生微血管的作用。现已研究证实circHIPK3可促进糖尿病视网膜血管的生成。另有研究报道过表达circHIPK3可抑制膀胱癌细胞... 

【文章来源】：遵义医科大学贵州省

【文章页数】：107 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

原代CSCs培养注：A：培养第3天（×100倍，标尺=100μm）；B：培养第5天（×100倍，标尺=100μm）；C：培养第7-8天（×100倍，标尺=100μm）；D：培养第10天（×100倍，标尺=100μm）

细胞密度达 50%左右（图 2C）。培养至第 5 天，细胞继续增殖，形态未见明显变化，细胞融合可达 80%-90%（图2D）。图 2：MACS 分选后获得的 c-kit+CSCs注：A：MACS 分选后立即观察（×100 倍，标尺=100μm）；B：MACS 分选后 1 天（×100 倍，标尺=100μm）；C：MACS 分选后 3 天（×100 倍，标尺=100μm）；D：MACS 分选后 5 天（×100 倍，标尺=100μm）。2.2 MACS 分选获得 c-kit+CSCs 的鉴定2.2.1 流式细胞术鉴定 c-kit+CSCs 表面标记物 c-kit 的表达流式细胞术检测 MACS 分选后心脏干细胞表面标记物的表达情况，结果显46

图 3：流式细胞术鉴定 c-kit+CSCs 表面标记物的表达情况2.2.2 细胞免疫荧光鉴定 c-kit+CSCs 表面标记分子的表达经 MACS 分选获得 CSCs 采用细胞免疫荧光技术鉴定其表面标记分子 c-kit的表达情况，结果显示，MACS 分选获得 CSCs 表达 c-kit 分子达 90%以上（图 4）。图 4：细胞免疫荧光鉴定经 MACS 分选后 CSCs 中 c-kit 分子的表达注：倒置荧光显微镜观察 MACS 分选获得 CSCs 表达 c-kit 分子达 90%以上（×200 倍，标尺=20μm）。2.3 c-kit+CSCs 来源 Exosomes 的浓度测定及鉴定

【参考文献】：
期刊论文
[1]Pro?ling and Validation of the Circular RNA Repertoire in Adult Murine Hearts[J]. Tobias Jakobi,Lisa F.Czaja-Hasse,Richard Reinhardt,Christoph Dieterich.  Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2016(04)



本文编号：3287594