Cdc42在泡沫细胞形成和动脉粥样硬化中的作用
发布时间：2021-07-19 21:27
研究背景:动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）是一类以血管内膜下脂质异常堆积为特征的慢性炎性疾病,可诱发中风,心肌梗死,外周血管疾病,肾脏疾病等严重病变。巨噬细胞在病变部位局灶性聚集激活、吞噬低密度脂蛋白形成泡沫细胞是动脉粥样硬化形成过程中的关键一环,但其具体发病机制尚未完全清晰。据报道,在炎症反应过程中,Cdc42活化参与了巨噬细胞的迁移与吞噬,然而,Cdc42在动脉粥样硬化巨噬细胞激活和泡沫细胞形成中的作用未见详细报道。本文利用巨噬细胞特异性敲除Cdc42基因小鼠探讨巨噬细胞Cdc42对动脉粥样硬化的影响和作用机制。实验方法:1.利用ApoE缺失小鼠与Lyz2Cre小鼠（髓系特异性表达Cre重组酶小鼠）或Cdc42fl/fl小鼠交配,子代交配多代得到目的小鼠即ApoE缺失背景下髓系特异性敲除Cdc42小鼠2.建立动脉粥样硬化模型:将8周龄大小Cdc42敲除小鼠与对照小鼠进行致动脉粥样硬化饮食（D12108C）连续喂养16周;每周记录小鼠体重变化情况。3.喂养16周后分离小鼠主动脉,进行油红染色,观察斑块形成情况,检测血清中胆固醇、甘油三酯、HD...
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
巨噬细胞脂蛋白摄取和流出的机制[12]
第2章材料与方法7图2.2小鼠交配策略2.1.2小鼠基因型鉴定（1）小鼠基因组DNA提取1）对所需鉴定小鼠进行编号，剪取合适长度的脚趾或小鼠尾尖置于1.5mLEP管中并标注对应编号。2）向EP管中加入100μLLysisbufferA，置于95℃金属浴中孵育1小时。3）向EP管中加入100μLLysisbufferB，混匀离心，上清中即含有DNA模板（2）小鼠基因型鉴定1）根据表2.1混制PCR扩增体系表2.1PCR扩增体系Cdc42、Cre扩增体系ApoE扩增体系试剂体积试剂体积2×Taq酶7μL2×Taq酶6μLForwardPrimer（10μM）0.5μLCommonPrimer（10μM）0.3μLReversePrimer0.5μLWildTypeReverse0.3μL杂交多代ApoE-/-Cdc42fl/flCre+ApoE+/-Cdc42fl/+Cre+ApoE+/-Cdc42fl/+Cre-ApoE-/-Cdc42fl/flCre+ApoE-/-Cdc42fl/flCre-
第3章实验结果24第3章实验结果3.1构建ApoE缺陷背景下巨噬细胞特异性敲除Cdc42转基因小鼠按照如前所述的交配策略，获得ApoE缺陷背景下巨噬细胞特异性敲除Cdc42C57BL/6转基因小鼠（ApoE-/-Cdc42fl/flLyz2cre+），为确定获取转基因小鼠为实验目的鼠，我们分别从DNA、RNA、蛋白质水平确定小鼠基因型。3.1.1基因型鉴定ApoE-/-&Cdc42双敲小鼠如前图2.1所示，Cdc42flox等位基因扩增片段大小为412bp，Cdc42野生型等位基因扩增片段大小为206bp；ApoE突变型等位基因扩增片段大小为250bp，ApoE野生型等位基因扩增片段大小为155bp；Cre重组酶扩增片段大小为400bp（阳性）。依次混合PCR反应体系，分别进行PCR扩增鉴定，鉴定结果如图3.1所示。其中基因型为ApoE-/-Cdc42fl/flCre+（又称FF+）为目的实验敲除小鼠，基因型为ApoE-/-Cdc42fl/flCre-（又称FF-）为实验对照小鼠。图3.1小鼠基因型鉴定
【参考文献】：
期刊论文
[1]《中国心血管病报告2018》概要[J]. 胡盛寿,高润霖,刘力生,朱曼璐,王文,王拥军,吴兆苏,李惠君,顾东风,杨跃进,郑哲,陈伟伟. 中国循环杂志. 2019(03)
[2]mTOR-Cdc42信号通路对慢性阻塞性肺疾病小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响[J]. 王云洁,刘晓菊,党苗苗,曾晓丽,包海荣. 中华医学杂志. 2016 (46)
[3]动脉粥样硬化发病的炎症机制的研究进展[J]. 刘俊田. 西安交通大学学报(医学版). 2015(02)
硕士论文
[1]特异性敲除巨噬细胞Cdc42加重盲肠结扎穿刺（CLP）诱导的小鼠脓毒症及其机制研究[D]. 郑怀宇.南昌大学 2017
[2]巨噬细胞特异性敲除Cdc42基因加重细菌脂多糖LPS诱导的小鼠炎症反应[D]. 王媛.南昌大学 2016
本文编号：3291461
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
巨噬细胞脂蛋白摄取和流出的机制[12]
第2章材料与方法7图2.2小鼠交配策略2.1.2小鼠基因型鉴定（1）小鼠基因组DNA提取1）对所需鉴定小鼠进行编号，剪取合适长度的脚趾或小鼠尾尖置于1.5mLEP管中并标注对应编号。2）向EP管中加入100μLLysisbufferA，置于95℃金属浴中孵育1小时。3）向EP管中加入100μLLysisbufferB，混匀离心，上清中即含有DNA模板（2）小鼠基因型鉴定1）根据表2.1混制PCR扩增体系表2.1PCR扩增体系Cdc42、Cre扩增体系ApoE扩增体系试剂体积试剂体积2×Taq酶7μL2×Taq酶6μLForwardPrimer（10μM）0.5μLCommonPrimer（10μM）0.3μLReversePrimer0.5μLWildTypeReverse0.3μL杂交多代ApoE-/-Cdc42fl/flCre+ApoE+/-Cdc42fl/+Cre+ApoE+/-Cdc42fl/+Cre-ApoE-/-Cdc42fl/flCre+ApoE-/-Cdc42fl/flCre-
第3章实验结果24第3章实验结果3.1构建ApoE缺陷背景下巨噬细胞特异性敲除Cdc42转基因小鼠按照如前所述的交配策略，获得ApoE缺陷背景下巨噬细胞特异性敲除Cdc42C57BL/6转基因小鼠（ApoE-/-Cdc42fl/flLyz2cre+），为确定获取转基因小鼠为实验目的鼠，我们分别从DNA、RNA、蛋白质水平确定小鼠基因型。3.1.1基因型鉴定ApoE-/-&Cdc42双敲小鼠如前图2.1所示，Cdc42flox等位基因扩增片段大小为412bp，Cdc42野生型等位基因扩增片段大小为206bp；ApoE突变型等位基因扩增片段大小为250bp，ApoE野生型等位基因扩增片段大小为155bp；Cre重组酶扩增片段大小为400bp（阳性）。依次混合PCR反应体系，分别进行PCR扩增鉴定，鉴定结果如图3.1所示。其中基因型为ApoE-/-Cdc42fl/flCre+（又称FF+）为目的实验敲除小鼠，基因型为ApoE-/-Cdc42fl/flCre-（又称FF-）为实验对照小鼠。图3.1小鼠基因型鉴定
【参考文献】：
期刊论文
[1]《中国心血管病报告2018》概要[J]. 胡盛寿,高润霖,刘力生,朱曼璐,王文,王拥军,吴兆苏,李惠君,顾东风,杨跃进,郑哲,陈伟伟. 中国循环杂志. 2019(03)
[2]mTOR-Cdc42信号通路对慢性阻塞性肺疾病小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响[J]. 王云洁,刘晓菊,党苗苗,曾晓丽,包海荣. 中华医学杂志. 2016 (46)
[3]动脉粥样硬化发病的炎症机制的研究进展[J]. 刘俊田. 西安交通大学学报(医学版). 2015(02)
硕士论文
[1]特异性敲除巨噬细胞Cdc42加重盲肠结扎穿刺（CLP）诱导的小鼠脓毒症及其机制研究[D]. 郑怀宇.南昌大学 2017
[2]巨噬细胞特异性敲除Cdc42基因加重细菌脂多糖LPS诱导的小鼠炎症反应[D]. 王媛.南昌大学 2016
本文编号：3291461
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