TIR/BB环拟似物AS-1对压力过负荷导致的心室重构及心力衰竭的影响及其机制研究

发布时间：2021-07-21 04:28

　　背景心力衰竭是多种心脏疾病发展的严重阶段,是心血管疾病患者的首要死亡原因。我们课题组的前期研究发现,TIR/BB环拟似物AS-1可以通过抑制IL-1R介导的My D88信号通路改善压力过负荷诱导的心肌肥大。虽然压力过负荷诱导的心肌肥大、心肌纤维化以及心力衰竭是一系列连续的病理生理学过程,但是,疾病的不同阶段,参与调控的信号通路不完全相同。因此,AS-1是否对压力过负荷诱导病理性心肌肥大的严重阶段――心力衰竭具有保护作用,是否在心脏已经发生代偿性心肌肥大之后还可影响疾病进程,对疾病具有一定的治疗作用,目前尚无文献报道。并且AS-1调控压力过负荷诱导的心力衰竭的具体分子机制也有待阐明。目的1.明确AS-1是否对压力过负荷诱导的心力衰竭具有预防及治疗作用。2.阐明AS-1是否对机械过度牵张诱导的心肌成纤维细胞活化及其旁分泌具有一定的调控作用。3.阐释AS-1对机械过度牵张诱导心肌成纤维细胞活化及其旁分泌作用的分子调控机制。方法1.动物在体实验通过主动脉弓缩窄术模拟左心室压力过负荷增加复制小鼠心力衰竭模型,并给予AS-1干预（腹腔注射,剂量为50mg/kg/d）。为阐明AS-1对压力过负荷诱导... 

【文章来源】：南京医科大学江苏省

【文章页数】：141 页

【学位级别】：博士

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英文摘要
前言
第一部分 AS-1 对压力过负荷导致的心室重塑及心力衰竭的影响
    引言
    材料与方法
        1.实验材料
            1.1 实验动物
            1.2 实验仪器
            1.3 实验材料
            1.4 主要试剂配制
        2.实验方法
            2.1 动物模型复制及实验分组
            2.2 TAC模型建立成功的评价
            2.3 超声心动图检测小鼠心脏结构及功能
            2.4 标本收集与处理
            2.5 心肌组织Masson染色
            2.6 心肌组织羟脯氨酸测定
            2.7 心肌组织交联胶原检测（限制性胃蛋白酶降解试验）
            2.8 实时定量PCR
            2.9 蛋白表达检测
        3.数据统计
    实验结果
        1.AS-1 对压力过负荷诱导的心室重塑及心力衰竭具有预防作用
            1.1 超声多普勒对小鼠主动脉弓缩窄程度的评价
            1.2 AS-1 可以延缓压力过负荷诱导的心肌肥大
            1.3 AS-1 可以减轻压力过负荷诱导的心肌纤维化
            1.4 AS-1 可以改善压力过负荷诱导的心功能衰竭
        2.AS-1 对压力过负荷诱导的心力衰竭具有治疗作用
            2.1 AS-1 可以延缓压力过负荷诱导的向心性心肌肥大向离心性心肌肥大及心力衰竭的发展
            2.2 AS-1 可以抑制压力过负荷诱导的心肌肥大发展为心肌纤维化
    分析与讨论
第二部分 AS-1 对机械过度牵张诱导心肌成纤维细胞活化及其旁分泌作用的影响
    引言
    材料与方法
        1.实验材料
            1.1 实验动物
            1.2 实验仪器
            1.3 实验试剂
            1.4 主要试剂配制
        2.实验方法
            2.1 新生大鼠心肌成纤维细胞培养
            2.2 机械压力刺激心肌成纤维细胞
            2.3 心肌细胞条件培养基的制备
            2.4 细胞免疫荧光
            2.5 EDU检测成纤维细胞增殖
            2.6 Tunel染色检测心肌细胞凋亡
            2.7 ELISA检测
            2.8 实时定量PCR
            2.9 蛋白表达检测
        3.数据统计
    实验结果
        1. AS-1 对机械过度牵张诱导的心肌成纤维细胞活化的调控作用
            1.1 AS-1 可抑制机械过度牵张诱导的心肌成纤维细胞增殖
            1.2 AS-1 可抑制机械过度牵张诱导的心肌成纤维细胞分化
            1.3 AS-1 可降低机械过度牵张诱导心肌成纤维细胞胶原合成增加
        2.机械过度牵张诱导活化的心肌成纤维细胞对心肌细胞的旁分泌调控作用
        3.AS-1 抑制机械过度牵张所致的心肌成纤维细胞旁分泌作用
            3.1 AS-1 可抑制机械过度牵张心肌成纤维细胞分泌旁分泌因子
            3.2 AS-1 可改善机械过度牵张诱导活化的心肌成纤维细胞旁分泌所致的心肌细胞肥大及凋亡
    分析与讨论
第三部分 AS-1 对机械过度牵张诱导心肌成纤维细胞活化及其旁分泌作用的调控机制
    引言
    材料与方法
        1.实验材料
        2.实验方法
            2.1 小干扰RNA合成
            2.2 小干扰RNA转染
            2.3 新生大鼠心肌成纤维细胞培养
            2.4 机械压力刺激心肌成纤维细胞
            2.5 心肌细胞条件培养基的制备
            2.6 细胞免疫荧光
            2.7 EDU检测成纤维细胞增殖
            2.8 Tunel染色检测心肌细胞凋亡
            2.9 实时定量PCR
            2.10 蛋白表达检测
        3.数据统计
    实验结果
        1.AS-1 可上调压力过负荷诱导的心肌组织中LATS1表达的下降
        2.AS-1 可上调机械过度牵张诱导的心肌成纤维细胞中LATS1表达的下降
        3.AS-1 可抑制机械过度牵张诱导的心肌成纤维细胞中YAP表达的增加
        4.AS-1 通过LATS1调控机械过度牵张诱导的心肌成纤维细胞活化
            4.1 心肌成纤维细胞转染siLATS1可有效敲低细胞中LATS1的表达
            4.2 AS-1 通过LATS1调控机械过度牵张诱导的心肌成纤维细胞的增殖
            4.3 AS-1 通过LATS1调控机械过度牵张诱导的心肌成纤维细胞的分化
            4.4 AS-1 通过LATS1下调机械过度牵张诱导的心肌成纤维细胞胶原合成增加
        5.干扰心肌细胞LATS1表达可降低AS-1 对机械过度牵张诱导心肌成纤维细胞旁分泌所致的心肌细胞肥大的保护作用
        6.干扰心肌细胞LATS1表达对AS-1 在机械过度牵张诱导心肌成纤维细胞旁分泌所致的心肌细胞凋亡中的作用无明显影响
    分析与讨论
小结
参考文献
综述
    References
附录
攻读学位期间发表研究论文及科研工作情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠主动脉弓不同程度缩窄模型的评价与比较[J]. 高云,宋娟,阙玲琍,李跃华.  南京医科大学学报(自然科学版). 2014(08)



本文编号：3294308