hiPS来源心肌细胞模型体系的优化及应用

发布时间：2021-08-06 23:44

　　背景:心血管疾病（Cardiovascular disease,CVD）是一类严重威胁人类健康的重大疾病。由于心肌细胞难以再生,细胞替代治疗是未来用于治疗CVD的重要手段之一,而心肌细胞的来源和质量是实现细胞替代治疗的关键。诱导多能干细胞（Induced pluripotent stem cells,iPS）及其体外定向分化为心肌细胞（Induced pluripotent stem cells derived cardiomyocytes,iPS-CM）技术的出现,为研究心血管疾病、药物心脏毒性、治疗心肌损伤及心脏再生医学等带来了希望。尽管研究者们尝试了多种方法体外诱导人诱导多能干细胞（Human induced pluripotent stem cells,hiPS）向心肌细胞（Cardiomyocytes,CM）定向分化,但尚存在着不同细胞系间分化效率不稳定、分化体系复杂、培养体系价格昂贵等缺陷。目前体外分化获得的hiPS-CM是多种亚型心肌细胞的混合群体,有必要建立一种单细胞培养体系为hiPS-CM表型分析、单细胞测序、细胞治疗等相关研究及应用提供细胞来源。研究方法:1.首先对... 

【文章来源】：浙江理工大学浙江省

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

biPS和hES的AP染

分化方法的基础上，通过调整了小分子抑制剂ＣＨＩＲ９９０２１和ＩＷＰ２的处理时间和浓度，建??立了优化的心肌细胞诱导分化体系。以细胞的搏动面积作为观察指标，诱导效率从最初只??有少量的球形点状搏动细胞到全盘整片搏动，几乎１００％细胞发生搏动。图２．５结果显示，??ＣＨＩＲ９９０２１浓度为６卜ｉＭ，?ＩＷＰ２浓度为３吨／ｍＬ?（６．５?ｐＭ）且处理３?ｄ时搏动的心肌细胞??面积最大。??ｈｉＰＳ和ｈＥＳ体外心肌细胞诱导分化的阶段可分如图２．６所示，ｄ０为人ＰＳＣ未分化阶??段；ｄ０－ｄ２为分化中胚层阶段；ｄ２－ｄ５为心肌祖细胞阶段；ｄ５－ｄ７为心肌前体细胞阶段；??ｈＰＳＣ开始分化时，细胞形态不断发生变化，第１－２?ｄ出现较多细胞死亡，随着分化进行，??周边不断长出新的细胞；在分化的第８?ｄ，细胞出现局部小造型地搏动，继而小灶型搏动??越来越多，到第１０?ｄ左右，形成成片的单层搏动细胞。??２０??

?ｄｌＳ??ｍｍ?ｉｍ??图２．６?ｈｉＰＳ分化为心肌细胞流程图??Ｆｉｇ?２．６?Ｏｕｔｌｉｎｅ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｍｅｔｈｏｄ?ｆｏｒ?ｈｕｍａｎ?ｉＰＳ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ?ｉｎｔｏ?ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ??３．３?ｈｉＰＳ－ＣＭ?和?ｈＥＳ－ＣＭ?的鉴定??２１??


本文编号：3326713