动脉粥样硬化进程中环指蛋白10的表达变化及平滑肌细胞生物学特性改变的试验研究
发布时间：2021-08-11 04:20
目的:构建动脉粥样硬化动物模型,探究动脉粥样硬化发生发展的不同阶段时RNF10（环指蛋白10）表达水平的动态变化以及平滑肌细胞生物学特性的变化情况。方法:选取ApoE基因敲除鼠（ApoE-/-）共24只,采用空气干燥法损伤小鼠的颈动脉并以高脂饲料进行饲养,诱导动脉粥样硬化的形成。将24只小鼠中随机分为A、B、C、D四组（每组6只）,其中A组作为正常对照组（小鼠不做颈动脉损伤处理并采用普通饲料饲养）,B组小鼠在颈动脉损伤后采用高脂饲料连续喂养8周,C组小鼠在颈动脉损伤后采用高脂饲料连续喂养12周,D组小鼠在颈动脉损伤后采用高脂饲料连续喂养16周。在各时间点处死小鼠,分离平滑肌细胞并进行原代培养。颈动脉样本进行HE染色和油红O染色并观察,采用免疫组化检测RNF10、SMA、SMHC、VEGF的表达情况。采用免疫荧光对细胞进行鉴定,CCK8实验检测各组细胞的增殖活性,流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况,采用划痕实验来检测各组细胞迁移能力的变化,蛋白免疫印迹法检测平滑肌细胞中RNF10、SMA和SMHC蛋白的表达水平,细胞免疫荧光检测各组平滑肌细胞表型的变化情况。结果:HE实验结果显示B组样本中...
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
四组组织样本的HE染色结果；第一行为镜下20X观察结果,第二行为同一视野镜下40X观察结果
第3章结果15染色，视野中染色面积占总面积的比率为30%；C组中脂质沉积明显，有大量染色区域，视野中染色面积占总面积的比率为60%；D组中出现局部深染色，视野中染色面积占总面积的比率约为90%。图2各组动脉组织的冰冻油红O染色结果；第一行为镜下10X视野所见,第二行为同一视野镜下20X观察结果。3.3免疫组织化学染色结果各组免疫组化染色结果见图3。A组中可见组织内RNF10、SMA和SMHC染色强阳性，VEGF染色阴性。B组斑块组织内RNF10、SMA和SMHC染色阳性，VEGF染色阳性。C组中组织内SMA和SMHC染色弱阳性，VEGF染色强阳性。D组中组织内SMA和SMHC染色阳性，VEGF染色阳性。各指标在各组中的具体染色评分见表1。据阳性染色物质的定位，可见RNF10主要存在于泡沫细胞、巨噬细胞、平滑肌细胞及内皮细胞内。结果提示：随着粥样硬化程度加深，RNF10在斑块内的表达呈现逐渐下降然后趋于稳定的趋势，SMA和SMHC在AS进程中，其在平滑肌细胞内的表达呈现出逐渐下降然后小幅度上升的趋势。RNF10、SMA和SMHC的免疫组化结果见图3。
第3章结果16表1各组细胞中各个指标的免疫组化染色评分结果groupRNF10SMASMHCVEGFA10.6±1.111.0±0.410.5±0.62.5±0.4B6.2±0.57.6±0.57.8±0.48.6±0.8C4±0.65.7±0.74.9±0.811.2±0.5D5.2±0.88.2±0.67.5±0.57.9±1.2细胞胞浆或者细胞核染色深黄或棕色作为染色阳性，分数在0～3分判定为阴性，4～6分为弱阳性，6-9分为阳性，9-12则判定为强阳性，分数越高代表靶基因表达程度越高。图3四组组织样本的RNF10、SMA、SMHC和VEGF指标免疫组化结果3.4SMC原代细胞鉴定通过免疫荧光技术检测SMC细胞特异性蛋白α-SMA的表达，结果如图1所示，在细胞上检测到α-SMA的表达，表明该细胞为SMC细胞。免疫荧光技
【参考文献】：
期刊论文
[1]快速构建不稳定型动脉粥样硬化小鼠模型的方法研究[J]. 黄凌晶,付春梅,方代龙,金全胜,宋相容,刘咏梅. 中国新药杂志. 2019(03)
[2]ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化模型构建[J]. 梁璐,洪瑞云,周敏,张毅,邹海林,钟一鸣,王烈峰. 赣南医学院学报. 2017(03)
[3]ApoE缺陷大鼠动脉粥样硬化模型的构建[J]. 徐敏,韦舒杰,张彦,严鹏,苏立男,李莹,马双陶,李德,杨永健. 中国动脉硬化杂志. 2017(01)
[4]胰岛素样生长因子-1对动脉粥样硬化处血管平滑肌细胞的影响[J]. 吕淑萍,尚茹茹,张锦,李飞虹,王兴兴,文仙仙,刘晓红. 中华临床医师杂志(电子版). 2016(22)
[5]可溶性血管内皮生长因子受体1对动脉粥样硬化斑块的作用[J]. 周仪华,王舒,袁影. 中国组织工程研究. 2016(18)
[6]动脉粥样硬化动物模型构建的方法与现状[J]. 黄爱良,黄荣志,黄小倩,黄建华,周燕. 中国组织工程研究. 2015(27)
[7]血管内皮生长因子和低氧诱导因子1α在颈动脉粥样硬化性狭窄患者血清中的表达及临床意义[J]. 高峡,陈俊. 血栓与止血学. 2015(03)
[8]中国心血管病报告2013概要[J]. 陈伟伟,高润霖,刘力生,朱曼璐,王文,王拥军,吴兆苏,胡盛寿. 中国循环杂志. 2014(07)
[9]Paramyxovirus evasion of innate immunity: Diverse strategies for common targets[J]. Michelle D Audsley,Gregory W Moseley. World Journal of Virology. 2013(02)
博士论文
[1]RNF10对代谢紊乱大鼠颈动脉再狭窄的作用和机制研究[D]. 余贵泉.重庆医科大学 2018
硕士论文
[1]Apoe和Ldlr基因敲除大鼠动脉粥样硬化疾病模型的构建及其表型比较研究[D]. 赵永亮.华东师范大学 2016
本文编号：3335439
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
四组组织样本的HE染色结果；第一行为镜下20X观察结果,第二行为同一视野镜下40X观察结果
第3章结果15染色，视野中染色面积占总面积的比率为30%；C组中脂质沉积明显，有大量染色区域，视野中染色面积占总面积的比率为60%；D组中出现局部深染色，视野中染色面积占总面积的比率约为90%。图2各组动脉组织的冰冻油红O染色结果；第一行为镜下10X视野所见,第二行为同一视野镜下20X观察结果。3.3免疫组织化学染色结果各组免疫组化染色结果见图3。A组中可见组织内RNF10、SMA和SMHC染色强阳性，VEGF染色阴性。B组斑块组织内RNF10、SMA和SMHC染色阳性，VEGF染色阳性。C组中组织内SMA和SMHC染色弱阳性，VEGF染色强阳性。D组中组织内SMA和SMHC染色阳性，VEGF染色阳性。各指标在各组中的具体染色评分见表1。据阳性染色物质的定位，可见RNF10主要存在于泡沫细胞、巨噬细胞、平滑肌细胞及内皮细胞内。结果提示：随着粥样硬化程度加深，RNF10在斑块内的表达呈现逐渐下降然后趋于稳定的趋势，SMA和SMHC在AS进程中，其在平滑肌细胞内的表达呈现出逐渐下降然后小幅度上升的趋势。RNF10、SMA和SMHC的免疫组化结果见图3。
第3章结果16表1各组细胞中各个指标的免疫组化染色评分结果groupRNF10SMASMHCVEGFA10.6±1.111.0±0.410.5±0.62.5±0.4B6.2±0.57.6±0.57.8±0.48.6±0.8C4±0.65.7±0.74.9±0.811.2±0.5D5.2±0.88.2±0.67.5±0.57.9±1.2细胞胞浆或者细胞核染色深黄或棕色作为染色阳性，分数在0～3分判定为阴性，4～6分为弱阳性，6-9分为阳性，9-12则判定为强阳性，分数越高代表靶基因表达程度越高。图3四组组织样本的RNF10、SMA、SMHC和VEGF指标免疫组化结果3.4SMC原代细胞鉴定通过免疫荧光技术检测SMC细胞特异性蛋白α-SMA的表达，结果如图1所示，在细胞上检测到α-SMA的表达，表明该细胞为SMC细胞。免疫荧光技
【参考文献】：
期刊论文
[1]快速构建不稳定型动脉粥样硬化小鼠模型的方法研究[J]. 黄凌晶,付春梅,方代龙,金全胜,宋相容,刘咏梅. 中国新药杂志. 2019(03)
[2]ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化模型构建[J]. 梁璐,洪瑞云,周敏,张毅,邹海林,钟一鸣,王烈峰. 赣南医学院学报. 2017(03)
[3]ApoE缺陷大鼠动脉粥样硬化模型的构建[J]. 徐敏,韦舒杰,张彦,严鹏,苏立男,李莹,马双陶,李德,杨永健. 中国动脉硬化杂志. 2017(01)
[4]胰岛素样生长因子-1对动脉粥样硬化处血管平滑肌细胞的影响[J]. 吕淑萍,尚茹茹,张锦,李飞虹,王兴兴,文仙仙,刘晓红. 中华临床医师杂志(电子版). 2016(22)
[5]可溶性血管内皮生长因子受体1对动脉粥样硬化斑块的作用[J]. 周仪华,王舒,袁影. 中国组织工程研究. 2016(18)
[6]动脉粥样硬化动物模型构建的方法与现状[J]. 黄爱良,黄荣志,黄小倩,黄建华,周燕. 中国组织工程研究. 2015(27)
[7]血管内皮生长因子和低氧诱导因子1α在颈动脉粥样硬化性狭窄患者血清中的表达及临床意义[J]. 高峡,陈俊. 血栓与止血学. 2015(03)
[8]中国心血管病报告2013概要[J]. 陈伟伟,高润霖,刘力生,朱曼璐,王文,王拥军,吴兆苏,胡盛寿. 中国循环杂志. 2014(07)
[9]Paramyxovirus evasion of innate immunity: Diverse strategies for common targets[J]. Michelle D Audsley,Gregory W Moseley. World Journal of Virology. 2013(02)
博士论文
[1]RNF10对代谢紊乱大鼠颈动脉再狭窄的作用和机制研究[D]. 余贵泉.重庆医科大学 2018
硕士论文
[1]Apoe和Ldlr基因敲除大鼠动脉粥样硬化疾病模型的构建及其表型比较研究[D]. 赵永亮.华东师范大学 2016
本文编号：3335439
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