LDL/LDLR负反馈调节新机制：脂噬介导的PCSK9-LDLR降解途径

发布时间：2021-08-13 04:13

　　动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）是一种以大中型动脉血管壁脂质积累为特征的慢性炎症性病变。脂质代谢的紊乱导致脂质在血管内膜的积累,尤其是低密度脂蛋白（low-density lipoprotein,LDL）的积累是动脉粥样硬化病变发展的始动因素。血浆中LDL主要是通过低密度脂蛋白受体（low density lipoprotein receptor,LDLR）摄入细胞而进行代谢。LDL/LDLR途径是负反馈调节系统,其在维持血浆和细胞内脂质稳态中起重要作用。脂噬是一种新的选择性自噬,其可通过自噬体选择性识别脂质并将其运送到溶酶体降解来调节脂质代谢。脂噬在清除过量脂质,维持细胞稳态和预防AS进展中发挥重要作用。前蛋白转化酶枯草溶菌素9（proprotein convertase subtilisin kexin type 9,PCSK9）是一个与脂质代谢调节密切相关的基因,其通过介导细胞表面的LDLR的降解来参与脂质代谢。那么,脂噬是否可能通过调节PCSK9的表达影响LDLR的表达,从而调节脂质代谢。因此,本课题旨在探讨Hep G2细胞脂噬对PCSK9-LDLR降解途径... 

【文章来源】：南华大学湖南省

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【学位级别】：硕士

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LDL处理24h对HepG2细胞荷脂的影响（×400）

南华大学硕士学位论文20图4.2LDL处理HepG2细胞24h后细胞荷脂情况（×400）4.2细胞免疫荧光检测LDL对HepG2细胞膜表面LDLR的影响为了验证LDL处理是否会引起LDLR负反馈效应。我们进行了细胞膜上LDLR免疫荧光检测。将HepG2细胞培养于24孔板中，待细胞贴壁后，用PBS缓冲液清洗2次，更换无血清培养基培养12小时。PBS缓冲液清洗2次，换10%血清培养基培养，用100μg/mlLDL处理HepG2细胞24小时。观察实验我们发现，与Control组比较，Starvation组细胞膜上的红色荧光增强，LDL处理组细胞膜上的红色荧光减弱（图4.3）。表明LDL处理能够明显降低HepG2细胞膜上LDLR的表达，引起负反馈效应。

第四章实验结果21图4.3LDL处理24h对HepG2细胞膜上LDLR的影响（×400）4.3LDL对HepG2细胞脂噬的影响4.3.1LDL对HepG2细胞LC3、P62、LAMP1蛋白表达的影响为了观察LDL对HepG2细胞脂噬的影响。本实验探讨了LDL对LC3、P62、LAMP1的影响。自噬主要由三个连续的步骤组成，包括自噬体的形成，自噬体底物向溶酶体的运输和自噬溶酶体的降解。LC3是脂噬的标志蛋白，当脂噬被诱导时，胞质LC3-I与磷脂酰乙醇胺结合，形成LC3-II并定位于自噬体膜上，其含量的多少与自噬体数量呈正相关。因此，LC3-II可反映脂噬活性。P62作为脂噬的底物，其表达水平与脂噬活性呈负相关。P62水平的降低可反映脂噬活性增强，相反，P62的增加提示脂噬、溶酶体降解途径被抑制。LAMP1是自噬溶酶体的标志蛋白。用100μg/mlLDL处理HepG2细胞24小时后，Westernblot检测LC3-II、P62、LAMP1的蛋白表达。结果显示，与Control组比较，Starvation组LC3-II表达水平增高，LAMP1表达水平降低，P62的蛋白表达无统计学意义，这可能是因为自噬体和溶酶体结合受阻或自噬溶酶体降解功能下降所导致。LDL处理组LC3-II、LAMP1表达水平增高，P62表达水平降低，表明LDL能诱导脂


本文编号：3339720