PLIN2通过内质网应激/SREBP2介导Ox-LDL诱导的RAW264.7巨噬细胞内脂质蓄积
发布时间：2021-08-20 02:46
【目的】阐明PLIN2与SREBP2的关系,探讨PLIN2在巨噬细胞中促进脂质蓄积的机制。【方法】首先,使用50mg/L Ox-LDL与RAW264.7巨噬细胞孵育不同的时间,用Western blot检测细胞内PLIN2以及SREBP2的蛋白含量;其次,利用细胞转染技术分别使PLIN2沉默表达、PLIN2过表达后,加入50mg/L Ox-LDL处理细胞24小时,用Western blot检测细胞内SREBP2及其靶基因HMGCR的蛋白变化情况,使用油红O染色来观察细胞内的脂质蓄积变化;再次,沉默表达和过表达PLIN2后,用游离胆固醇检测试剂盒检测细胞内游离胆固醇含量变化,Western blot检测细胞内GRP78蛋白含量变化,细胞免疫荧光技术观察细胞内SREBP2蛋白的核转位;最后,使用内质网应激抑制剂4-PBA预处理细胞2小时后,检测荷脂巨噬细胞内SREBP2以及HMGCR的蛋白含量变化。【结果】用50mg/L Ox-LDL处理RAW264.7巨噬细胞不同时间后,PLIN2的表达随着孵育时间延长而增加。同时,SREBP2的表达则先增加于24小时达到最高值,然后减少。与对照组相比,...
【文章来源】：南华大学湖南省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Ox-LDL对巨噬细胞PLIN2以及SREBP2蛋白表达的影响
图 1.2 Ox-LDL 处理 RAW264.7 巨噬细胞不同时间细胞的生长状态（×100）A 图：0h; B 图：24h； C 图：48h4.2 过表达 PLIN2 对荷脂 RAW264.7 巨噬细胞中 SREBP2、HMGCR 蛋白表达的影响将保存的 pQCXIP 和 pQCXIP-HA-PLIN2 进行质粒扩增和抽提。紫外分光光度计显示 pQCXIP 和 pQCXIP-HA-PLIN2 的浓度分别为 1.1μg/μL 以及 1.25μg/μL。使用 lip6000TM转染试剂分别将 pQCXIP 和 pQCXIP-HA-PLIN2 表达载体转染入RAW264.7 细胞。将细胞分为 4 组，对照组、Ox-LDL 组、PQCXIP 以及PQCXIP-HA-PLIN2 加入 Ox-LDL（50mg/L）处理 24 小时组。处理后对细胞内总蛋白进行提取，Western blot 检测细胞在荷脂状态下 PLIN2、SREBP2 以及
图 2 过表达 PLIN2 对荷脂 RAW264.7 巨噬细胞中 SREBP2、HMGCR 蛋白表达的影响*表示与 control 组相比，p＜0.05；#表示与 PLIN2 过表达组相比，P＜0.05；&表示与 Ox-LDL组相比，p＜0.05 （n=3）4.3 沉默表达 PLIN2 对荷脂 RAW264.7 巨噬细胞中 SREBP2、HMGCR 蛋白表达的影响将保存的pSuper-retro-scramble siRNA和pSuper-retro-PLIN2 siRNA进行质粒扩增和抽提。紫外分光光度计结果显示 pSuper-retro-scramble siRNA 和pSuper-retro-PLIN2 siRNA 的浓度分别为 0.7μg/μL 以及 0.9μg/μL。分别将pSuper-retro-scramble siRNA 和 pSuper-retro-PLIN2 siRNA 表达载体转染入
【参考文献】：
期刊论文
[1]脂肪分化相关蛋白对泡沫细胞形成中脂质蓄积的影响[J]. 张瑞,李晓歌,袁旭,郭东铭,袁中华. 中国动脉硬化杂志. 2018(09)
[2]酯酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶的研究进展[J]. 王晓微,高明明. 中国动脉硬化杂志. 2018(07)
[3]巨噬细胞在血管炎症及动脉粥样硬化中的作用[J]. 孙雨萌,左海奇,田野. 中国循证心血管医学杂志. 2017(12)
[4]三酰甘油脂肪酶与动脉粥样硬化的研究进展[J]. 王彦方. 中国循证心血管医学杂志. 2017(07)
[5]内质网应激与动脉粥样硬化的研究进展[J]. 裴芊芊,曾子谦,董丽华. 中国细胞生物学学报. 2017(04)
[6]巨噬细胞极化与动脉粥样硬化[J]. 谭艳美,孟磊,汪江波,袁中华. 中国动脉硬化杂志. 2016(02)
[7]中性胆固醇酯水解酶与动脉粥样硬化[J]. 孟磊,谭艳美,袁中华. 中南医学科学杂志. 2015(02)
[8]巨噬细胞荷脂过程中脂肪分化相关蛋白与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1及中性胆固醇酯水解酶相互结合[J]. 乔运成,彭娟,刘志强,郭东铭,袁中华. 中国动脉硬化杂志. 2014(12)
[9]SREBP介导的基因表达的调控（英文）[J]. 赵小平,杨法军. 生物物理学报. 2012(04)
[10]酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶-1与动脉粥样硬化[J]. 高小花,王庸晋. 心血管病学进展. 2011(04)
本文编号：3352652
【文章来源】：南华大学湖南省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Ox-LDL对巨噬细胞PLIN2以及SREBP2蛋白表达的影响
图 1.2 Ox-LDL 处理 RAW264.7 巨噬细胞不同时间细胞的生长状态（×100）A 图：0h; B 图：24h； C 图：48h4.2 过表达 PLIN2 对荷脂 RAW264.7 巨噬细胞中 SREBP2、HMGCR 蛋白表达的影响将保存的 pQCXIP 和 pQCXIP-HA-PLIN2 进行质粒扩增和抽提。紫外分光光度计显示 pQCXIP 和 pQCXIP-HA-PLIN2 的浓度分别为 1.1μg/μL 以及 1.25μg/μL。使用 lip6000TM转染试剂分别将 pQCXIP 和 pQCXIP-HA-PLIN2 表达载体转染入RAW264.7 细胞。将细胞分为 4 组，对照组、Ox-LDL 组、PQCXIP 以及PQCXIP-HA-PLIN2 加入 Ox-LDL（50mg/L）处理 24 小时组。处理后对细胞内总蛋白进行提取，Western blot 检测细胞在荷脂状态下 PLIN2、SREBP2 以及
图 2 过表达 PLIN2 对荷脂 RAW264.7 巨噬细胞中 SREBP2、HMGCR 蛋白表达的影响*表示与 control 组相比，p＜0.05；#表示与 PLIN2 过表达组相比，P＜0.05；&表示与 Ox-LDL组相比，p＜0.05 （n=3）4.3 沉默表达 PLIN2 对荷脂 RAW264.7 巨噬细胞中 SREBP2、HMGCR 蛋白表达的影响将保存的pSuper-retro-scramble siRNA和pSuper-retro-PLIN2 siRNA进行质粒扩增和抽提。紫外分光光度计结果显示 pSuper-retro-scramble siRNA 和pSuper-retro-PLIN2 siRNA 的浓度分别为 0.7μg/μL 以及 0.9μg/μL。分别将pSuper-retro-scramble siRNA 和 pSuper-retro-PLIN2 siRNA 表达载体转染入
【参考文献】：
期刊论文
[1]脂肪分化相关蛋白对泡沫细胞形成中脂质蓄积的影响[J]. 张瑞,李晓歌,袁旭,郭东铭,袁中华. 中国动脉硬化杂志. 2018(09)
[2]酯酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶的研究进展[J]. 王晓微,高明明. 中国动脉硬化杂志. 2018(07)
[3]巨噬细胞在血管炎症及动脉粥样硬化中的作用[J]. 孙雨萌,左海奇,田野. 中国循证心血管医学杂志. 2017(12)
[4]三酰甘油脂肪酶与动脉粥样硬化的研究进展[J]. 王彦方. 中国循证心血管医学杂志. 2017(07)
[5]内质网应激与动脉粥样硬化的研究进展[J]. 裴芊芊,曾子谦,董丽华. 中国细胞生物学学报. 2017(04)
[6]巨噬细胞极化与动脉粥样硬化[J]. 谭艳美,孟磊,汪江波,袁中华. 中国动脉硬化杂志. 2016(02)
[7]中性胆固醇酯水解酶与动脉粥样硬化[J]. 孟磊,谭艳美,袁中华. 中南医学科学杂志. 2015(02)
[8]巨噬细胞荷脂过程中脂肪分化相关蛋白与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1及中性胆固醇酯水解酶相互结合[J]. 乔运成,彭娟,刘志强,郭东铭,袁中华. 中国动脉硬化杂志. 2014(12)
[9]SREBP介导的基因表达的调控（英文）[J]. 赵小平,杨法军. 生物物理学报. 2012(04)
[10]酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶-1与动脉粥样硬化[J]. 高小花,王庸晋. 心血管病学进展. 2011(04)
本文编号：3352652
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