心肌缺血再灌注损伤大鼠上胸段脊髓差异基因表达分析

发布时间：2021-08-21 09:01

　　研究背景:心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemia-reperfusion injury,MIRI）是临床心脏病学的重要问题,指心肌缺血一段时间后,由于血液再通,导致的比血管闭塞时更为严重的心肌损伤。脊髓是神经系统的低级中枢,心脏的感觉神经和交感神经纤维在其内走行。近年来脊髓在心肌再灌注损伤的研究中发挥的作用日益受到重视。有研究表明心脏缺血再灌注损伤与心肌lncRNAs异常表达存在密切关系,但较少见到脊髓lncRNAs的异常表达对MIRI影响的报道。研究目的:探讨心肌缺血再灌注损伤时脊髓中lncRNAs的表达变化及其在再灌注早期发挥的潜在作用。研究方法:健康成年雄性Sprague Dawley大鼠（体重250-300 g）,随机分为2组,即control组和model组,制备心肌缺血再灌注损伤模型。心肌缺血30 min再灌注2 h后,迅速分离大鼠上胸段脊髓组织,应用转录组测序技术筛选脊髓中差异表达的mRNAs和lncRNAs,并通过Real-time PCR对部分表达高度异常的mRNAs和lncRNAs进行验证。通过GO分析和Pathway分析对差异基因进行功能分析以... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

脊神经的投射分布

华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文胸膜，避免暴力撕扯，减少出血。剪断第三肋骨，注意断端不要太靠近胸骨出血。用撑开器撑开胸腔，暴露心脏。用镊子轻轻撕开心包膜，润湿的棉球耳，判断冠状动脉的位置，一般在冠状静脉的左下方。用 6-0 的带线缝合针肺动脉根部与左心耳之间的一小束心肌，结扎线与血管间可放置一根长约 5明硅胶管，随后拉紧结扎线。结扎后肉眼可见左心室壁局部很快由红色变为苍图显示 ST 段明显抬高，T 波高尖，此为模型成功的标志。30 min 后松解结扎脉闭塞而苍白的心肌恢复血流灌注，颜色逐渐恢复，心电图显示抬高的 ST T 波逐渐恢复，表明冠脉再灌注成功。对照组模型中缝合线只穿过心肌，不，其余操作步骤与模型组相同。（图 2）

用无水乙醇进行脱水，后将切片置于二甲苯透明，风干后在已树胶封片，镜检。高通量测序模成功的模型组大鼠和假手术组各 3 只，手术结束后立即取出进行液氮速冻，保存于-80℃冰箱，用于转录组高通量测序。测序流程（图 3）：织首先提取总 RNA，检测 RNA 的浓度、纯度及完整度。单 2 ug，浓度≥100 ng/μL，OD 260/280 介于 1.8~2.2 之间。总 RNARNA 和 ncRNA；将 mRNA 片段化并以之为模板，合成 cDNA物合成 cDNA 第二链。合成的 cDNA 经纯化后进行末端修复，尿苷酶（UNG）降解第二条链，随后进行 PCR 扩增，构建na HiSeqTM 进行测序。


本文编号：3355305