急性抗氧化与低氧响应性纳米颗粒制备及用于心肌梗死治疗的实验研究

发布时间：2021-08-27 12:14

　　目的（1）构建低氧响应性的血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,简称VEGF）真核表达载体,建立体内、外递送方法并对其效能进行鉴定;（2）以聚乳酸-羟基乙酸共聚物（Polylactic acid-glycolic acid copolymer,PLGA）作为药物载体,探讨载体粒径对化药、核酸等不同药物释放的影响,优化针对不同药物的载体粒径参数;（3）针对心肌梗死后的急性氧化应激与长期的缺氧微环境特征,采用模块化和可控的层层组装技术开发具有急性抗氧化与低氧响应型VEGF调控表达的智能药物递送系统;（4）在体外细胞模型与心肌梗死小鼠模型中,对上述智能药物递送系统的心肌保护与心梗修复功能进行系统研究,以期建立新型的心肌梗死干预方法。方法（1）应用基因重组技术,在真核表达载体pGL4.73[hRluc/SV40]（pSV）质粒基础上,将2个串联的低氧敏感性EPO增强子插入启动子SV40上游,构建低氧响应型表达系统（pEPO-SV）,以海肾荧光素酶（Rluc）为下游报告基因,评价其低氧敏感性能;随后,将VEGF165基因取代Rluc插入到pEPO... 

【文章来源】：锦州医科大学辽宁省

【文章页数】：90 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

重组质粒构建注：EPO增强子通过酶切位点XhoⅠ和BglⅡ嵌入原质粒pSV构建重组子，目的基因

VEGF165 通 过 酶 切 位 点 Hind Ⅲ 和 Xba Ⅰ 嵌 入 进 质 粒 pEPO-SV ， 构 建 重 组 子pEPO-SV-VEGF。（二）质粒 DNA 测序及酶切鉴定1、PCR 检测。结果如图 1.2 为不同质粒中 EPO 增强子及 VEGF165 序列的 PCR 鉴定结果，图 A 不通泳道从左向右依次为：Marker，分别以质粒pcDNA3 .1、质粒pSV-VEGF和pEPO-SV-VEGF为模板PCR扩增得到VEGF165目的基因片段，大约 500bp 处的亮带（图 A）；图 B 泳道从左向右分别为 Marker、以质粒 pEPO、pEPO-SV 和 pEPO-SV-VEGF 为模板，PCR 扩增得到 EPO 串联增强子片段，大约 100bp 处的亮带，如图 B。

GAGGCCCTACGTGCTGTCTCACACAGCCTGTCTGAGGCGGCCCTACGTGCTGTCTCACACAGCCTGTCTGCCGGCGAGATCTGAGGCCCTACGTGCTGTCTCACACAGCCTGTCTGAGGCGGCCCTACGTGCTGTCTCACACAGCCTGTCTGCCGGCGAGATCT与测序序列完全匹配。验证。进一步通过酶切与 DNA 电泳验证质粒 pE成功插入，通过 HindⅢ和 XbaⅠ对质粒 pEPO-S通过琼脂糖凝胶电泳进行检测。琼脂糖凝胶电泳检带，500-750bp 区间条带与所插入的 VEGF165 成功插入；大于 2000bp 的条带区为切出的质粒骨

【参考文献】：
期刊论文
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[3]乳酸-羟基乙酸共聚物微球、纳米粒载药体系的研究进展[J]. 陈红丽,刘瑞,南文滨.  中国药房. 2012(37)
[4]VEGF165基因治疗对心肌梗死大鼠心功能和心肌细胞凋亡的影响[J]. 杨德寨,尹瑞兴,吴海,黄凯,巫相宏,陈宇明.  广西医科大学学报. 2005(02)



本文编号：3366333