利用hiPSC-CM研究致心律失常性右室心肌病中OBSCN基因突变的致病性及机制

发布时间：2021-09-06 08:06

　　背景致心律失常性右室心肌病是一种罕见的心肌病,以右心室肌进展性纤维脂肪化和致死性心律失常为主要特点,大部分与基因突变相关。OBSCN基因是一个主要在肌细胞中表达的基因,其蛋白产物obscurin分布于肌节中,参与横纹肌纤维的发育、正常肌浆网结构的维持等。已有报道OBSCN基因突变与肥厚型心肌病、左室致密化不全等心脏疾病相关。尚未有OBSCN基因突变引起致心律失常性右室心肌病的报道。有研究表明obscurin的Ig48结构域改变可以导致心肌细胞钙电流紊乱,从而引起心律失常。明确OBSCN基因突变是否是引起致心律失常性右室心肌病的原因,以及其潜在的致病机制对于进一步理解obscurin的功能,寻找ARVC的治疗手段非常重要。目的建立患者特异性诱导多能干细胞来源的心肌细胞的研究模型,明确OBSCN基因突变与致心律失常性右室心肌病疾病表型的关系,并探索潜在致病机制。方法选取临床确诊的一例携带OBSCN基因突变的致心律失常性右室心肌病患者,抽取其外周血,通过诱导外周血单个核细胞去分化建立患者特异性诱导多能干细胞系。通过诱导患者特异诱导多能干细胞定向分化为心肌细胞,建立患者特异性诱导多能干细胞来源... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：65 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１由外周血单核细胞至诱导多能干细胞的形态学变化

１．２诱导多能干细胞形态学观察??传代至Ｐ８时出现典型ｉＰＳＣ形态特征（图２），包括致密的克隆、紧致的中心和??光滑的边缘、细胞核大、核仁突出、核质比高。与此同时复苏健康对照来源的诱导??多能干细胞Ｐ２０代，与ＡＲＶＣ患者来源的诱导多能干细胞同时显微镜下观察，形态??基本类似，符合干细胞形态学特征。??Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＡＲＶＣ??Ｉ￣＝￣￣Ｉ?１?￣￣￣＇??？—么－?？??图２诱导多能干细胞细胞形态学。健康对照来源的诱导多能干细胞传代至Ｐ２１（左），??ＡＲＶＣ患者来源的诱导多能干细胞传代至Ｐ８?（右），倒置显微镜下观察到的细胞形??态。从上到下放大倍数依次为１０〇ｘ，２０〇ｘ，４０〇ｘ。??１５??

提取ｈｉＰＳＣ第６代细胞ＲＮＡ，利用ＲＴ－ｑＰＣＲ分析检测多能性基因ＰＯＬＷ７及??的表达情况，可见得到的ｉＰＳＣ细胞及Ｍ４７ＶＯＧ的表达量显著高于??ＭＳＣ，接近ｈＥＳＣ细胞（图４）。??２．５?＾??■?ＰＯＵ５Ｆ１??２?Ｊ?Ｔ?■?ＮＡＮＯＧ??■??Ｃ?１５??？２??Ｌ?＿??ＭＳＣ－Ｐ３?ｈｉＰＳＣ－Ｐ６?ｈＥＳＣ－Ｈｌ??图４多能性基因表达（ＲＴ－ｑＰＣＲ检测）。分别将ＭＳＣ和ｈｉＰＳＣ的表达量以ｈＥＳＣ??为标准进行标化，得到基因（蓝色）及（红色）的相对表达量水??平。ＭＳＣ，ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ?ｓｔｅｍ?ｃｅｌｌ，中胚层干细胞；ｈｉＰＳＣ，ｈｕｍａｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ?ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ??ｓｔｅｍ?ｃｅｌｌ，人诱导多能干细胞；ｈＥＳＣ，ｈｕｍａｎ?ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ?ｓｔｅｍ?ｃｅｌｌ，人胚胎干细胞。??１７??

【参考文献】：
博士论文
[1]TNNI基因突变致限制型心肌病患者诱导多能干细胞系的建立及其相关致病性研究[D]. 徐逸.北京协和医学院 2018



本文编号：3387091