阻断ATM/Chk2通路减轻心肌缺氧性损伤的机制探讨

发布时间：2021-09-08 14:55

　　背景急性心肌梗死（Acut myocardial infarction,AMI）是一种在动脉粥样硬化基础上,因血栓形成或斑块破裂阻塞血管而导致的心肌急性缺血缺氧性疾病,在全球范围内发病率和死亡率极高,严重危害人类健康。大量研究表明,细胞缺氧状态能够激活氧化应激反应,其产生的活性氧物质（Reactive oxygen species,ROS）可作为信号分子介导细胞凋亡。同时,ROS的累积能够引起包括DNA链断裂、DNA位点突变等多种形式的DNA损伤。为了维持基因组的完整性和稳定性,机体会启动一系列DNA损伤反应（DNA damage response,DDR）。DDR是一个复杂的反应过程,经典的DDR通路包括ATR/Chk1和ATM/Chk2通路。ATR和ATM均属磷脂酰肌醇-3-激酶样激酶家族（PI3K）成员,可通过激活下游细胞周期检查点蛋白Chk1和Chk2等,引起一系列磷酸化级联反应,介导细胞周期阻滞与DNA修复;当修复失败时,可进一步激活多条死亡信号通路,最终导致细胞凋亡。有文献报道,心肌梗死后,血循环中游离DNA水平会明显升高,可以作为检测心肌细胞损伤的灵敏指标,对疾病的监控以... 

【文章来源】：河南大学河南省

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
1 前言
2 材料、试剂与仪器
    2.1 材料与试剂
    2.2 仪器
    2.3 试剂配制方法
3 实验方法
    3.1 大鼠心肌梗死模型的建立
    3.2 新生大鼠原代心肌细胞（NRVMS）的分离及缺氧模型的建立
    3.3 大鼠心肌细胞系H9C2缺氧模型的建立
    3.4 HE染色
    3.5 TUNEL
        3.5.1 细胞
        3.5.2 石蜡切片
    3.6 免疫组化
    3.7 蛋白质的提取及BCA法测定蛋白浓度
        3.7.1 细胞蛋白质的提取
        3.7.2 BCA法测定蛋白浓度
    3.8 WESTERN BLOT
    3.9 免疫荧光
    3.10 流式细胞术
    3.11 细胞增殖活力实验（MTT）
    3.12 乳酸脱氢酶检测（LDH）
    3.13 CASPASE 3/7 活性检测
    3.14 SIRNA的转染
    3.15 统计学分析
4 实验结果
    4.1 大鼠心肌组织
        4.1.1 心肌梗死后细胞形态学变化
        4.1.2 心肌梗死可诱导心肌细胞发生凋亡
        4.1.3 DNA损伤反应参与大鼠心肌缺血缺氧性损伤
    4.2 大鼠心肌细胞系H9C2
        4.2.1 成功建立H9C2缺氧模型
        4.2.2 缺氧诱导H9C2细胞DNA损伤相关蛋白表达量增高
        4.2.3 阻断ATR/Chk1通路对缺氧诱导的H9C2细胞损伤无影响
        4.2.4 阻断ATM/Chk2通路对H9C2细胞缺氧性损伤有明显改善作用
        4.2.5 干扰Chk2能够减轻H9C2细胞缺氧性损伤
    4.3 大鼠原代心肌细胞（NRVMS）
        4.3.1 成功建立NRVMs缺氧模型
        4.3.2 阻断ATM/Chk2通路对NRVMs缺氧性损伤有保护作用
讨论
结论
参考文献
综述
    参考文献
在读期间参加的学术会议及研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]外周血循环DNA水平测定在急性心肌梗死中的临床意义[J]. 徐运强,刘蓓,赵召霞,王桂花,朱向辉,潘世扬,陈丹.  中国医疗器械杂志. 2012(06)
[2]ATM、ATR和DNA损伤介导的细胞周期阻滞[J]. 朱虹,缪泽鸿,丁健.  生命科学. 2007(02)
[3]DNA损伤与肿瘤发生的研究进展[J]. 谢成英,蔡育军,丁健.  中国癌症杂志. 2006(04)



本文编号：3390988