METTL3介导m6A修饰对巨噬细胞源性泡沫细胞凋亡及动脉粥样硬化的影响

发布时间：2021-09-11 12:17

　　[背景与目的]:动脉粥样硬化（atherosclerosis,As）是一种慢性炎症性疾病,其中血管炎症被认为是As发生发展的关键环节。当血管受损时,巨噬细胞作为免疫系统的主要效应细胞,被募集至受损部位并大量蓄积脂质形成泡沫细胞;与此同时,泡沫细胞促进大量的巨噬细胞、T淋巴细胞等炎症细胞聚集于损伤部位。这些免疫细胞可释放各种炎症介质进一步促进泡沫细胞形成,形成恶性循环,加剧As发生发展。巨噬细胞的相关调控机制是As疾病防治研究的重要环节。近年来,RNA修饰作为新兴调控方式,其对疾病的影响已受到学者的广泛关注。其中N6-甲基腺嘌呤（N6-methyladenosine,m6A）作为mRNA上最为丰富的修饰,对于基因转录、翻译、表达调控等生命进程发挥着重要调控作用。m6A修饰是指腺嘌呤第6位N原子上的甲基化修饰,其中METTL3（methyltransferase like 3,METTL3）亚基是m6A甲基转移酶复合体中的核心组分,在人体内广泛分布。近期研究发现,METTL3过表达可以抑制脂肪水平并降低胞内甘油三酯,另在心肌重构等功能中也发现METTL3具有重要调控作用。METTL3和m6... 

【文章来源】：南华大学湖南省

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

METTL3在人颈动脉动脉粥样硬化斑块内广泛表达（黑色虚线所标记部位为斑块坏死核心；Scalebar=100μm）

20图4.2METTL3在小鼠As斑块内广泛表达（图A、B：Scalebar=100μm；图C：Scalebar=20μm）巨噬细胞源性泡沫细胞是As斑块中的重要成分。内皮细胞受损后，单核细胞被募集到受损内皮周围分化成巨噬细胞，巨噬细胞荷脂后形成泡沫细胞，泡沫细胞随即不断分泌多种炎症因子促进斑块发展，斑块部位聚集的泡沫细胞对于斑块的稳定和发展发挥重要的调节作用。其中泡沫细胞的影响贯穿As整个周期。因此，本实验进一步检测在斑块中巨噬细胞源性泡沫细胞中METTL3的表达情况。免疫荧光实验将对此猜想进行验证。选用MAC3标记巨噬细胞，DAPI染核，并通过不同的荧光二抗分别结合MAC3（红）和METTL3（绿），将所得图片通过软件处理对二者表达进行共定位标记。荧光结果如下图4.3所示，在小鼠As斑块中，METTL3在斑块中广泛表达，箭头所指部位即为METLL3和巨噬细胞标记物的共同表达部位，这一结果说明METTL3存在于巨噬细胞源性泡沫细胞中。

21图4.3小鼠As斑块中，METTL3在巨噬细胞源性泡沫细胞内表达（B：小鼠As斑块中，METTL3的表达；C：小鼠As斑块中，巨噬细胞的表达；D：箭头所指部位即为巨噬细胞源性泡沫细胞和METTL3共同表达部位；Scalebar=100μm）以上结果说明，METTL3在人和小鼠的As斑块中均存在广泛表达，并且在巨噬细胞源性泡沫细胞中也广泛表达，METTL3与As斑块之间可能存在密切联系。为了进一步明确METTL3是否参与巨噬细胞源性泡沫细胞的相关调控，本项研究选取THP-1为研究对象，从细胞水平明确METTL3的调控作用。4.2METTL3和m6A修饰在巨噬细胞源性泡沫细胞中上调巨噬细胞泡沫化后对斑块稳定和发展尤为重要。为明确METTL3在巨噬细胞源性泡沫细胞中的变化，实验选取THP-1细胞经PMA诱导后形成巨噬细胞，并予以不同浓度的ox-LDL孵育处理，24h后提取不同组别的蛋白质，使用WB检测不同浓度ox-LDL的处理下METTL3的表达变化。结果显示经ox-LDL孵育后，METLL3的表达随ox-LDL浓度增加而出现增长（图4.4）。

【参考文献】：
期刊论文
[1]巨噬细胞凋亡与动脉粥样硬化[J]. 张艳,林玉壁,孙雷.  中国动脉硬化杂志. 2008(05)



本文编号：3392984