齐墩果酸经TBX20/PPARγ/PON2通路抑制ox-LDL诱导HUVEC细胞损伤

发布时间：2021-09-17 16:06

　　目的复制氧化性低密度脂蛋白（oxygenized low density lipoprotein,ox-LDL）诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）氧化损伤模型,从TBX20/PPARγ/PON2信号通路的角度探究齐墩果酸（oleanolic acid,OA）对该模型的保护作用。方法CCK-8筛选ox-LDL作用24h后损伤HUVECs的合适浓度、OA细胞毒性以及OA预保护时间和浓度。实验设计分组为:正常对照组、ox-LDL模型组、OA药物组（10,20,40μmol/L）;酶化学方法检测各分组细胞中过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、一氧化氮（NO）、总一氧化氮合酶（NOS）的活性或含量;电子自旋共振（ESR）技术检测细胞内活性氧（ROS）自由基和一氧化氮（NO）自由基的生成量;Real-time PCR和Western bolt技术检测TBX20、PPARγ、PON2mRNA和蛋白的表达;脂质体瞬时siRNA转染以及加入抑制剂使细胞中蛋白表达沉默,Western blot检测TBX2... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
第一章 实验材料
    1.1 主要试剂与材料
    1.2 细胞株
    1.3 仪器设备
第二章 实验方法
    2.1 人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的传代培养
    2.2 预实验筛选ox-LDL造模浓度以及OA保护作用浓度以及最佳预保护时间
        2.2.1 ox-LDL诱导的HUVECs氧化损伤模型的建立
        2.2.2 不同浓度OA对HUVECs的直接影响
        2.2.3 OA预保护时间的筛选
    2.3 实验分组及ox-LDL处理
    2.4 实验项目及检测指标
        2.4.1 OA对HUVECs氧化损伤的保护作用
        2.4.2 各组细胞中NO、NOS、CAT、GSH-PX活性或含量的测定
        2.4.3 电子自旋共振（ESR）同时检测各组细胞中一氧化氮(NO)以及活性氧（ROS）含量
        2.4.4 免疫印迹Western blot
        2.4.5 荧光定量PCR(Real-time PCR)
        2.4.6 siRNA脂质体转染
    2.5 统计学分析
第三章 实验结果
    3.1 CCK-8 法筛选ox-LDL造模浓度以及齐墩果酸细胞毒性
    3.2 不同浓度齐墩果酸预处理不同时间对HUVECs存活率的影响
    3.3 齐墩果酸对氧化损伤的HUVECs存活率的影响
    3.4 OA对细胞内NO、NOS、CAT、GSH-PX活性或含量影响
    3.5 ESR同时捕捉检测各组细胞内ROS及NO含量
    3.6 OA对ox-LDL损伤的HUVECs内TBX20、PPARγ、PON2蛋白以及mRNA表达的影响
    3.7 TBX20-siRNA转染效率检测
    3.8 TBX20 siRNA转染后HUVECs内TBX20、PPARγ蛋白含量检测
第四章 讨论
结论
参考文献
综述
    综述的参考文献
攻读学位期间的研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]齐墩果酸对oxLDL诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用[J]. 王道艳,王志,张峥,赵慧慧,韩彦弢.  青岛大学医学院学报. 2014(06)
[2]炎症与动脉粥样硬化关系研究进展[J]. 褚现明,李冰,安毅,董果雄.  中国分子心脏病学杂志. 2010(03)
[3]MTT法和CCK-8法检测悬浮细胞增殖的比较[J]. 侯春梅,李新颖,叶伟亮,曹曦元,肖鹤,黎燕.  军事医学科学院院刊. 2009(04)
[4]氧化应激与高血压血管内皮损伤[J]. 赵凯,杨万松.  天津医药. 2006(12)
[5]对氧磷酶基因多态性及血浆同型半胱氨酸硫内酯复合物水平与冠心病的关系[J]. 秦勤,李颖莉,赵福梅,王红,李杨,崔让庄,赵炳让.  中华心血管病杂志. 2006(09)
[6]过氧化物酶体增殖物激活受体γ与动脉粥样硬化[J]. 路一平,邱健.  医学研究生学报. 2006(06)
[7]Effects of oxidized low density lipoprotein on the growth of human artery smooth muscle cells[J]. ZHAO Gao-feng, SENG Jing-jing, ZHANG Hua and SHE Ming-peng Department of Thoracic Surgery, First Teaching Hospital, Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, China Department of Pathology, Institute of Basic Medical Sciences, Peking Union Medical College, Beijing 100005, China.  Chinese Medical Journal. 2005(23)
[8]Paraoxonase gene cluster variations associated with coronary heart disease in Chinese Han women[J]. SU Shao-yong, CHEN Jian-hong, HUANG Jian-feng, WANG Xiao-ling, ZHAO Jian-gong, SHEN Yan, QIANG Bo-qin and GU Dong-fengDivision of Population Genetics, Cardiovascular Institute and Fu Wai Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing 100037, China National Human Genome Center, Beijing, 3-707 North Yongchang Rd., Beijing 100176, China.  Chinese Medical Journal. 2005(14)
[9]血管内皮功能障碍与冠状动脉疾病[J]. 张钧华.  中华老年心脑血管病杂志. 2002(01)



本文编号：3399059