miR-20a/b靶向沉默ABCA1对胆固醇逆转运的影响

发布时间：2021-09-23 22:23

　　动脉粥样硬化性疾病严重危害人类健康。泡沫细胞的形成在动脉粥样硬化发展过程中起着至关重要的作用。所以,有效的阻止泡沫细胞,是防治动脉粥样硬化有效手段。动脉粥样硬化的的严重程度和血清高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）的含量呈现负相关。HDL-C拮抗动脉粥样硬化的主要机制在于参与胆固醇逆转运（RCT）过程。RCT的定义是,HDL把外周组织中过剩的胆固醇,转运到肝脏,经过代谢后变为胆汁酸排出体外的过程,能够阻止生成泡沫细胞,是较为公认的,防止动脉粥样硬化机制之一。在RCT过程中,细胞内胆固醇、磷脂通过三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）转移给apo A-I,它是HDL前体,新生成HDL,开始RCT过程,所以在RCT和新生成HDL中,ABCA1起着起始和限速作用。如果可以调节ABCA1蛋白的表达,就可以调节RCT,可以调控动脉粥样硬化。Micro RNA（mi RNA）是一类高度保守的,长度一般在22个核苷酸左右,单链形式存在的,非编码的RNA。mi RNA与靶基因m RNA的3’非编码区（UTR）互补结合,在转录后水平直接降解靶基因m RNA或抑制蛋白质翻译。一个靶基因能够被多个mi RNA... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：112 页

【学位级别】：博士

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前言
    参考文献
第一部分 生物信息学预测与实验验证mi R-20a/b与ABCA1的靶向结合
    1 材料与方法
        1.1 生物信息学预测网址
        1.2 主要试剂与仪器
        1.3 生物信息学预测方法
        1.4 实验技术
        1.5 统计分析
    2 结果
        2.1 mi R-20a/b序列高度保守
        2.2 ABCA13’UTR基因序列
        2.3 mi R-20a/b可以与ABCA1的m RNA的 3’UTR高度结合
        2.4 mi R-20a/b与ABCA1的m RNA 3’UTR结合自由能较低
        2.5 mi R-20a/b对荧光素酶报告基因表达水平的影响
    3 讨论
    4 结论
第二部分 mi R-20a/b靶向沉默泡沫细胞ABCA1表达对胆固醇流出的影响
    1 材料与方法
        1.1 实验试剂
        1.2 实验仪器
        1.3 主要溶液配制
        1.4 细胞培养
        1.5 实验分组
        1.6 mi RNA转染
        1.7 RNA提取和Real time PCR分析
        1.8 Western blot检测
        1.9 胆固醇流出测定
        1.10高效液相色谱（HPLC）检测胞内的胆固醇水平
        1.11统计学分析
    2 结果
        2.1 mi R-20a/b对THP-1 源性和RAW264.7 源性泡沫细胞ABCA1的影响
        2.2 mi R-20a/b对THP-1 源性和RAW264.7 源性泡沫细胞胆固醇流出的影响
        2.3 mi R-20a/b THP-1 源性和RAW264.7 源性泡沫细胞胆固醇含量的影响
    3 讨论
    4 结论
第三部分 mi R-20a/b对apo E-/-动脉粥样硬化小鼠ABCA1的表达及动脉粥样硬化的影响
    1 材料与方法
        1.1 实验动物
        1.2 实验试剂
        1.3 实验仪器
        1.4 主要溶液配制
        1.5 动物模型建立
        1.6 实验分组
        1.7 组织取材
        1.8 Real time PCR
        1.9 Western blot检测
        1.10 小鼠在体胆固醇流出率检测
        1.11 血脂水平检测
        1.12 油红O染色
        1.13 石蜡切片制作
        1.14 HE染色
        1.15 统计学分析
    2 结果
        2.1 Apo E-/-动脉粥样硬化小鼠mi R-20a/b的表达
        2.2 mi R-20a/b对apo E-/-动脉粥样硬化小鼠肝脏ABCA1的表达的影响
        2.3 mi R-20a/b对apo E-/-动脉粥样硬化小鼠巨噬细胞RCT的影响
        2.4 mi R-20a/b对apo E-/-动脉粥样硬化小鼠血脂水平的影响
        2.5 mi R-20a/b对apo E-/-动脉粥样硬化小鼠动脉粥样硬化病变的影响
    3 讨论
    4 结论
第四部分 冠心病患者血清mi R-20a/b的表达及意义
    1 材料和方法
        1.1 病例入选
        1.2 血液样本采集
        1.3 实验试剂
        1.4 实验仪器
        1.5 血生化项目检测
        1.6 Real time PCR检测血清mi R-20a/b和mi R-33
        1.7 统计学分析
    2 结果
        2.1 入选研究人员的基本临床资料
        2.2 入选研究人员mi R-33，mi R-20a/b的表达
        2.3 多因素分析
    3 讨论
    4 结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢
在学期间承担/参与的科研课题与研究成果
个人简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]High-density lipoprotein and atherosclerosis: Roles of lipid transporters[J]. Yoshinari Uehara,Keijiro Saku.  World Journal of Cardiology. 2014(10)
[2]MicroRNA在胆固醇逆转运中的调节作用[J]. 梁斌,蒋晓,边云飞,肖传实.  中国动脉硬化杂志. 2014(02)
[3]microRNA与胆固醇代谢[J]. 王昊,彭道泉.  中国动脉硬化杂志. 2011(04)



本文编号：3406530