Rab18通过PPARγ下调PLIN2减少巨噬细胞脂质蓄积
发布时间：2021-09-30 06:36
【背景与目的】本课题组前期研究发现,在THP‐1巨噬细胞中,高表达脂肪分化相关蛋白PLIN2能够促进脂质蓄积加速动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）的发生发展,但其具体发生机制尚不完全明了。因此,本研究的目的是为了阐明小GTP结合蛋白Rab18、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（Peroxisome proliferator-activated receptors,PPARγ）与PLIN2的关系,探讨PLIN2促进THP‐1人源性巨噬细胞脂质蓄积的机制。【方法】首先,将50μg/mL Ox‐LDL与THP‐1巨噬细胞共孵育,在不同的时间点利用Western blot检测细胞内Rab18、PPARγ及PLIN2表达情况,同时油红O染色法观察细胞内脂质蓄积的变化;然后,将质粒Rab18（WT）、Rab18（Q67L）和Rab18（S22N）分别转染THP‐1巨噬细胞,制备野生型Rab18细胞、高活型Rab18细胞和低活型Rab18细胞,并通过免疫荧光技术和Western blot检测质粒转染情况。结果显示转染成功后,我们将50μg/mL Ox‐LDL与各转染细胞共孵育24小时,...
【文章来源】：南华大学湖南省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
在巨噬细胞中随着Ox-LDL孵育时间的延长脂质蓄积增加（Sclarbar=20um）
南华大学硕士学位论文18图1.2Ox-LDL对巨噬细胞Rab18、PPARγ和PLIN2表达的影响*P＜0.05，vs.0h（n=3）综上所述，巨噬细胞内脂质蓄积及Rab18、PPARγ和PLIN2表达量的变化随Ox-LDL孵育时间的延长而增加，故细胞内脂质蓄积增多可能与Rab18、PPARγ及PLIN2表达量增加有关。另外，Rab18表达在6h时较0h时无统计学意义，说明在巨噬细胞中，Rab18可能不参与Ox-LDL诱导的脂滴的生成。4.2Rab18对荷脂巨噬细胞内脂质蓄积的影响首先，将购买的含Rab18（WT）、Rab18（Q67L）和Rab18（S22N）的大肠杆菌分别进行养菌、挑菌、摇菌及质粒提龋通过紫外分光光度计检测各质粒浓度及纯度，将三种质粒用转染试剂lip6000TM转入巨噬细胞，制备野生型Rab18细胞、高活型Rab18细胞和低活型Rab18细胞。将细胞分为4组，对照组（control）、野生型Rab18组（WT）、高活型Rab18组（HA）、低活型Rab18组（LA）。用Ox-LDL处理各组细胞，24h后通过免疫荧光技术及Westernblot检测各组细胞的转染情况（图2.1，2.2）。Westernblot结果显示，WT组、HA组和LA组中Rab18表达较control组明显升高；细胞免疫荧光观察不同活性的Rab18质粒转染情况，结果如图2.1所示，绿色为不同活性Rab18质粒，综上说明不同活性Rab18细胞转染成功。另外，Westernblot结果显示，各转染组间相比Rab18表达无差异，这说明我们
第4章实验结果19所观察的不同活性Rab18功能的不同与它们本身的生物学作用有关，与其蛋白表达量无关。图2.1WT（野生型）、HA（高活型）和LA（低活型）Rab18细胞的转染情况（Sclarbar=20um）图2.2各转染组细胞中Rab18表达变化情况*P＜0.05，vs.control（n=3）然后，油红O染色法观察各组细胞脂质蓄积情况。结果显示，与control相比，WT组与HA组细胞内脂质蓄积均明显减少，而LA组细胞脂质蓄积无明显变化。这说明，细胞内活化型的Rab18可减少脂质蓄积。
【参考文献】：
期刊论文
[1]肠道菌群与动脉粥样硬化的关系[J]. 王安璐,李秋忆,徐浩,陈可冀. 中国动脉硬化杂志. 2020(02)
[2]血脂康对高脂血症患者低密度脂蛋白颗粒和氧化型低密度脂蛋白的影响[J]. 张月,徐瑞霞,张彦,吴亚茹,李建军. 中国动脉硬化杂志. 2020(03)
[3]肥胖对动脉粥样硬化的影响[J]. 孙恒,齐潇雁,肖新华. 中国动脉硬化杂志. 2019(10)
[4]我国动脉粥样硬化基础研究几个热点领域的新进展[J]. 赵战芝,姜志胜. 中国动脉硬化杂志. 2019(08)
[5]衰弱与老年心脑血管疾病关系的研究进展[J]. 樊凡,杨翠,王庆松. 中华老年心脑血管病杂志. 2019(02)
[6]脂肪分化相关蛋白对泡沫细胞形成中脂质蓄积的影响[J]. 张瑞,李晓歌,袁旭,郭东铭,袁中华. 中国动脉硬化杂志. 2018(09)
[7]细胞内脂滴及其相关Rab蛋白的研究进展[J]. 袁红富,周文胜,王佳. 临床与病理杂志. 2016(03)
[8]PAT家族蛋白研究进展[J]. 刘志强,刘清南,陶媛,郭东铭,袁中华. 中南医学科学杂志. 2012(02)
[9]PPAR-γ作用及其相关信号转导途径[J]. 陈永熙,王伟铭,周同,陈楠. 细胞生物学杂志. 2006(03)
[10]脂肪分化相关蛋白在兔动脉粥样硬化模型中的表达[J]. 袁中华,杨永宗,尹卫东,易光辉,王佐,杨保堂,万载阳,吴孟津. 中国动脉硬化杂志. 2004(05)
本文编号：3415308
【文章来源】：南华大学湖南省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
在巨噬细胞中随着Ox-LDL孵育时间的延长脂质蓄积增加（Sclarbar=20um）
南华大学硕士学位论文18图1.2Ox-LDL对巨噬细胞Rab18、PPARγ和PLIN2表达的影响*P＜0.05，vs.0h（n=3）综上所述，巨噬细胞内脂质蓄积及Rab18、PPARγ和PLIN2表达量的变化随Ox-LDL孵育时间的延长而增加，故细胞内脂质蓄积增多可能与Rab18、PPARγ及PLIN2表达量增加有关。另外，Rab18表达在6h时较0h时无统计学意义，说明在巨噬细胞中，Rab18可能不参与Ox-LDL诱导的脂滴的生成。4.2Rab18对荷脂巨噬细胞内脂质蓄积的影响首先，将购买的含Rab18（WT）、Rab18（Q67L）和Rab18（S22N）的大肠杆菌分别进行养菌、挑菌、摇菌及质粒提龋通过紫外分光光度计检测各质粒浓度及纯度，将三种质粒用转染试剂lip6000TM转入巨噬细胞，制备野生型Rab18细胞、高活型Rab18细胞和低活型Rab18细胞。将细胞分为4组，对照组（control）、野生型Rab18组（WT）、高活型Rab18组（HA）、低活型Rab18组（LA）。用Ox-LDL处理各组细胞，24h后通过免疫荧光技术及Westernblot检测各组细胞的转染情况（图2.1，2.2）。Westernblot结果显示，WT组、HA组和LA组中Rab18表达较control组明显升高；细胞免疫荧光观察不同活性的Rab18质粒转染情况，结果如图2.1所示，绿色为不同活性Rab18质粒，综上说明不同活性Rab18细胞转染成功。另外，Westernblot结果显示，各转染组间相比Rab18表达无差异，这说明我们
第4章实验结果19所观察的不同活性Rab18功能的不同与它们本身的生物学作用有关，与其蛋白表达量无关。图2.1WT（野生型）、HA（高活型）和LA（低活型）Rab18细胞的转染情况（Sclarbar=20um）图2.2各转染组细胞中Rab18表达变化情况*P＜0.05，vs.control（n=3）然后，油红O染色法观察各组细胞脂质蓄积情况。结果显示，与control相比，WT组与HA组细胞内脂质蓄积均明显减少，而LA组细胞脂质蓄积无明显变化。这说明，细胞内活化型的Rab18可减少脂质蓄积。
【参考文献】：
期刊论文
[1]肠道菌群与动脉粥样硬化的关系[J]. 王安璐,李秋忆,徐浩,陈可冀. 中国动脉硬化杂志. 2020(02)
[2]血脂康对高脂血症患者低密度脂蛋白颗粒和氧化型低密度脂蛋白的影响[J]. 张月,徐瑞霞,张彦,吴亚茹,李建军. 中国动脉硬化杂志. 2020(03)
[3]肥胖对动脉粥样硬化的影响[J]. 孙恒,齐潇雁,肖新华. 中国动脉硬化杂志. 2019(10)
[4]我国动脉粥样硬化基础研究几个热点领域的新进展[J]. 赵战芝,姜志胜. 中国动脉硬化杂志. 2019(08)
[5]衰弱与老年心脑血管疾病关系的研究进展[J]. 樊凡,杨翠,王庆松. 中华老年心脑血管病杂志. 2019(02)
[6]脂肪分化相关蛋白对泡沫细胞形成中脂质蓄积的影响[J]. 张瑞,李晓歌,袁旭,郭东铭,袁中华. 中国动脉硬化杂志. 2018(09)
[7]细胞内脂滴及其相关Rab蛋白的研究进展[J]. 袁红富,周文胜,王佳. 临床与病理杂志. 2016(03)
[8]PAT家族蛋白研究进展[J]. 刘志强,刘清南,陶媛,郭东铭,袁中华. 中南医学科学杂志. 2012(02)
[9]PPAR-γ作用及其相关信号转导途径[J]. 陈永熙,王伟铭,周同,陈楠. 细胞生物学杂志. 2006(03)
[10]脂肪分化相关蛋白在兔动脉粥样硬化模型中的表达[J]. 袁中华,杨永宗,尹卫东,易光辉,王佐,杨保堂,万载阳,吴孟津. 中国动脉硬化杂志. 2004(05)
本文编号：3415308
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