SEREX法筛选免疫相关性全血细胞减少症患者造血细胞靶抗原及其初步鉴定
发布时间：2021-10-30 07:14
目的:筛选并鉴定出可能会作为免疫相关性全血细胞减少（immuno-related pancytopenia,IRP）患者骨髓造血细胞上的自身抗原。背景:IRP是一种免疫介导的血细胞减少症。前期研究发现IRP发病机制首先是某种原因引起T淋巴细胞调控失衡,Th2细胞比例增多导致B淋巴细胞数量/亚群/功能异常,进而产生抗骨髓未成熟造血细胞自身抗体并破坏或抑制骨髓造血,最后引起的血细胞减少症候群。但是IRP自身抗体所攻击的造血细胞上的靶抗原目前尚不明确,之前本中心利用SDS-PAGE联合免疫印迹法发现了几种靶抗原,包括G蛋白偶联受体（GPCR）156变异体,P链人红细胞带3蛋白,乳铁蛋白及WD重复序列蛋白。自身免疫性疾病的靶抗原往往数个甚至数十个,所以以上方法所验证的抗原仅为极少数,因此本实验采用重组cDNA表达文库的血清学分析法（SEREX）继续寻找IRP自身抗体的靶抗原,并且进一步验证其抗原性。材料与方法:我们构建了K562细胞的噬菌体展示文库,用它替代人骨髓CD34+细胞的蛋白文库。然后用IRP患者和正常健康对照血清对这个文库进行血清免疫学分析。噬菌体表达蛋白的初步挑选是建立在患者与正常...
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：116 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
琼脂糖凝胶电泳检测总RNA质量
图 1 琼脂糖凝胶电泳检测总 RNA 质量1.2.2 LD-PCR 琼脂糖凝胶电泳图2的Lane1,3,5,7,9,11分别为K562细胞一链cDNA经过LD-PCR18,20,22,24,26,28个循环后后合成二链的电泳结果。Lane2,4,6,8,10,12为试剂盒自带的阳性对照标本的结果。最佳的电泳结果应为smear状，并且里边没有明显的条带，根据电泳结果选择了22个循环条件作为最佳的条件。图3显示该条件下对应的结果Lane5的smear分布为4000bp以内，符合人类mRNA大小的分布范围。
图 3 .LD-PCR22 个循环电泳结果。Lane1 为 K562，Lane2 为阳性对照，图 4 .蓝白斑检测测定文库的重组率1.2.3 过柱后 cDNA 凝胶电泳cDNA构建cDNA文库是最佳选择，小于500bp的DNA片量，提高文库滴度，但这将极大地增加下一步筛选的工作量文库应选择适当大小的cDNA。本实验采用Chrome Spin-400cDNA，取500bp以上cDNA回收去除了小片断DNA，提高了5的Lane1-17分别为过柱后收集的1-17滴液体，并且第8，9，而且小片段(<100bp)比较少，因此取这3管液体混合。图 5.过柱后 cDNA 凝胶电泳图
【参考文献】：
期刊论文
[1]利用噬菌体随机肽库筛选Rh（D）血型抗原的模拟表位[J]. 刘淑均,沈继龙,卞茂红,张循善,闻慧琴. 安徽医科大学学报. 2013(07)
[2]抗体药物研发概况[J]. 沈倍奋. 河南大学学报(医学版). 2012(04)
[3]免疫相关性全血细胞减少症患者树突状细胞亚群、数量及其临床意义[J]. 滕广帅,付蓉,刘惠,王红蕾,王一浩,阮二宝,瞿文,梁勇,王国锦,王晓明,刘鸿,吴玉红,宋嘉,王化泉,邢莉民,关晶,王珺,李丽娟,邵宗鸿. 中国实验血液学杂志. 2012(03)
[4]Serex技术筛选SLE新抗原临床研究进展[J]. 甘德芳,何帮顺,陈兴国,夏永祥. 国际检验医学杂志. 2012(02)
[5]噬菌体展示技术系统发展进展[J]. 孟繁梅,张朝辉,艾云灿. 遗传. 2011(10)
[6]噬菌体展示技术在蛋白质研究中的应用[J]. 李珣,任珍珍,钟国华. 生命的化学. 2009(04)
[7]辅助噬菌体在噬菌体展示中的应用及研究进展[J]. 杜东霞,张冉. 微生物学通报. 2009(02)
[8]ROLE OF B LYMPHOCYTE AND ITS SUBPOPULATIONS IN PATHOGENESIS OF IMMUNORELATED PANCYTOPENIA[J]. Rong Fu, Zong-hong Shao, Hong Liu, Yu-hong Wu, Hua-quan Wang, and Li-min Xing Department of Hematology and Oncology, General Hospital of Tianjin Medical University, Tianjin 300052. Chinese Medical Sciences Journal. 2007(03)
[9]SUBTYPES OF B LYMPHOCYTES IN PATIENTS WITH AUTOIMMUNE HEMOCYTOPENIA[J]. Li-min Xing1, Zong-hong Shao1, Rong Fu1, Hong Liu1, Jun Shi2, Jie Bai2, Mei-feng Tu2, Hua-quan Wang1, Zhen-zhu Cui2, Hai-rong Jia2, Juan Sun2, and Chong-li Yang2 1Department of Hematology and Oncology, General Hospital of Tianjin Medical University, Tianjin 300052 2Department of Hematology, Institute of Hematology and Blood Diseases Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Tianjin 300020. Chinese Medical Sciences Journal. 2007(02)
[10]系统性红斑狼疮血管炎相关自身抗原的血清学筛选[J]. 杨满,秦伟,冯胜刚,邓洪新,樊均明,周钦,魏于全. 四川大学学报(医学版). 2007(01)
本文编号：3466305
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：116 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
琼脂糖凝胶电泳检测总RNA质量
图 1 琼脂糖凝胶电泳检测总 RNA 质量1.2.2 LD-PCR 琼脂糖凝胶电泳图2的Lane1,3,5,7,9,11分别为K562细胞一链cDNA经过LD-PCR18,20,22,24,26,28个循环后后合成二链的电泳结果。Lane2,4,6,8,10,12为试剂盒自带的阳性对照标本的结果。最佳的电泳结果应为smear状，并且里边没有明显的条带，根据电泳结果选择了22个循环条件作为最佳的条件。图3显示该条件下对应的结果Lane5的smear分布为4000bp以内，符合人类mRNA大小的分布范围。
图 3 .LD-PCR22 个循环电泳结果。Lane1 为 K562，Lane2 为阳性对照，图 4 .蓝白斑检测测定文库的重组率1.2.3 过柱后 cDNA 凝胶电泳cDNA构建cDNA文库是最佳选择，小于500bp的DNA片量，提高文库滴度，但这将极大地增加下一步筛选的工作量文库应选择适当大小的cDNA。本实验采用Chrome Spin-400cDNA，取500bp以上cDNA回收去除了小片断DNA，提高了5的Lane1-17分别为过柱后收集的1-17滴液体，并且第8，9，而且小片段(<100bp)比较少，因此取这3管液体混合。图 5.过柱后 cDNA 凝胶电泳图
【参考文献】：
期刊论文
[1]利用噬菌体随机肽库筛选Rh（D）血型抗原的模拟表位[J]. 刘淑均,沈继龙,卞茂红,张循善,闻慧琴. 安徽医科大学学报. 2013(07)
[2]抗体药物研发概况[J]. 沈倍奋. 河南大学学报(医学版). 2012(04)
[3]免疫相关性全血细胞减少症患者树突状细胞亚群、数量及其临床意义[J]. 滕广帅,付蓉,刘惠,王红蕾,王一浩,阮二宝,瞿文,梁勇,王国锦,王晓明,刘鸿,吴玉红,宋嘉,王化泉,邢莉民,关晶,王珺,李丽娟,邵宗鸿. 中国实验血液学杂志. 2012(03)
[4]Serex技术筛选SLE新抗原临床研究进展[J]. 甘德芳,何帮顺,陈兴国,夏永祥. 国际检验医学杂志. 2012(02)
[5]噬菌体展示技术系统发展进展[J]. 孟繁梅,张朝辉,艾云灿. 遗传. 2011(10)
[6]噬菌体展示技术在蛋白质研究中的应用[J]. 李珣,任珍珍,钟国华. 生命的化学. 2009(04)
[7]辅助噬菌体在噬菌体展示中的应用及研究进展[J]. 杜东霞,张冉. 微生物学通报. 2009(02)
[8]ROLE OF B LYMPHOCYTE AND ITS SUBPOPULATIONS IN PATHOGENESIS OF IMMUNORELATED PANCYTOPENIA[J]. Rong Fu, Zong-hong Shao, Hong Liu, Yu-hong Wu, Hua-quan Wang, and Li-min Xing Department of Hematology and Oncology, General Hospital of Tianjin Medical University, Tianjin 300052. Chinese Medical Sciences Journal. 2007(03)
[9]SUBTYPES OF B LYMPHOCYTES IN PATIENTS WITH AUTOIMMUNE HEMOCYTOPENIA[J]. Li-min Xing1, Zong-hong Shao1, Rong Fu1, Hong Liu1, Jun Shi2, Jie Bai2, Mei-feng Tu2, Hua-quan Wang1, Zhen-zhu Cui2, Hai-rong Jia2, Juan Sun2, and Chong-li Yang2 1Department of Hematology and Oncology, General Hospital of Tianjin Medical University, Tianjin 300052 2Department of Hematology, Institute of Hematology and Blood Diseases Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Tianjin 300020. Chinese Medical Sciences Journal. 2007(02)
[10]系统性红斑狼疮血管炎相关自身抗原的血清学筛选[J]. 杨满,秦伟,冯胜刚,邓洪新,樊均明,周钦,魏于全. 四川大学学报(医学版). 2007(01)
本文编号：3466305
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