腺病毒介导人凝血因子Ⅸ基因在ADSCs中的表达

发布时间：2021-11-04 15:32

　　目的观察腺病毒介导的人凝血因子Ⅸ（hFⅨ）基因在小鼠脂肪干细胞（adipose-derived stem cells,ADSCs）中的表达情况。方法1细胞分离培养及鉴定准备4只3⁴周龄雄性SPF级C57BL/6J小鼠,采用颈椎脱臼法将小鼠处死,在超净台中操作,提取位于两侧腹股沟处的脂肪组织,用1%胶原酶充分消化,获得单细胞悬液,接种在培养瓶,进行原代小鼠脂肪干细胞及传代培养。对细胞形态进行观察,用CCK-8试剂法测定细胞生长曲线,采用流式细胞术对细胞表型进行鉴定,成脂成骨诱导对细胞分化潜能进行鉴定。2细胞分组及转染选取生长旺盛的第3代ADSCs,随机分成3组:空白组:将DMEM作为对照加入ADSCs培养瓶,空载组:以空病毒Ad-GFP转染ADSCs,实验组:以重组腺病毒Ad-hFⅨ转染ADSCs。将携带hⅨ基因的腺病毒转染小鼠脂肪干细胞,将转染后的ADSCs与未转染时细胞形态及生长曲线进行对比,观察两组之间有无变化。3转染后细胞检测采用RT-PCR检测细胞中hFⅨ基因的表达情况,应用Western blot检测细胞内以及培养细胞上清液中hFⅨ蛋白的表达。采用ELI... 

【文章来源】：华北理工大学河北省

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

ADSCs生长曲线

Fig.2 Growth curve of ADSCs表 3 第 3 代 ADSCs 不同培养时间吸光度(x ±s)Table 3 Absorbance value of P3 of ADSCs at different time组别培养时间（d）1 2 3 4 5 6 7转染组 0.41 0.01 0.47 0.03 0.64 0.04 1.79 0.032.69±0.07 3.15 0.04 3.19 0.13未转染组 0.46 0.01 0.51 0.03 0.64 0.06 1.63 0.04 2.52 0.06 2.83 0.01 3.04 0.06注：每组各时点样本量 n=33) 成脂诱导结果ADSCs 贴壁融合约 50%加入成脂诱导液诱导，细胞增殖分裂受到抑制，胞体逐渐增大，呈不规则形，诱导 14d 后，油红 O 染色，倒置显微镜下观察有红色脂滴形成（图 3）。证明成脂诱导成功。

第 1 章 实验研究4) 成骨诱导结果ADSCs 贴壁融合约 50%加入成骨诱导液诱导，诱导 3d 后，细胞由长梭圆形或多角形，可见细小黑色颗粒沉积，继续诱导至第 9d，茜素红染相差显微镜下观察到橙红色钙化骨节（图 4）。证明成骨诱导成功。

【参考文献】：
期刊论文
[1]按需治疗血友病患者关节健康状况临床分析[J]. 马乐,范猛,薛峰,姜文学.  中国实验血液学杂志. 2019(01)
[2]浙江省血友病诊疗专家指导意见[J].   浙江医学. 2017(09)
[3]血友病B替代治疗药物研究现状及进展[J]. 严红,曾凡一.  生物工程学报. 2016(02)



本文编号：3476009