miR-130a/PPAR-γ在ox-LDL诱导人冠状动脉内皮细胞损伤中的作用
发布时间：2021-11-06 14:48
目的冠状动脉粥样硬化是冠心病的发病基础,高血脂作为重要的环境因素,通过引起冠状动脉内皮细胞功能障碍促进动脉粥样硬化的发生。低密度脂蛋白（ox-LDL）对冠脉内皮的损伤发生贯穿于冠心病的发病整个过程中,最终导致心梗的发生。减少和预防ox-LDL诱导的冠脉内皮细胞损伤对于预防冠心病的发生,降低冠心病的致死率有重要意义。目前,已发现多种Micro-RNA参与冠状动脉粥样硬化的发生和发展,以往发现miR-130a在冠心病患者中表达异常,且在急性心肌梗死后的心肌细胞损伤的作用已明确,我们推测它可能在冠脉内皮功能障碍中同样发挥作用。本研究旨在探讨miR-130a对靶基因PPAR-γ的调控在冠脉内皮细胞的炎症反应的影响,从分子水平为冠状动脉粥样硬化性心脏病的诊疗提供新的研究方向。方法体外培养传代原代人冠脉内皮细胞（HCAECs）,（1）使用不同浓度的ox-LDL刺激正常HCAECs 24h,诱导损伤,通过细胞形态学的观察确定损伤模型的建立,使用RTq PCR和蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测不同浓度ox-LDL刺激诱导损伤后冠脉内皮细胞中miR-130a的表达差异及PPAR-γ的mR...
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
正常冠脉内皮形态学表现（×100）；Box-LDL刺激后冠脉内皮损伤形态学表现（×100）
青岛大学硕士学位论文193.miR-130a抑制PPAR-γ的表达使用miR-130amimic、miR-130ainhibitor、miR-NC转染细胞48h后，使用RT-qPCR检测转染效果，结果显示，与对照组和miR-NC组相比，miR-130amimic组miR-130a的表达水平明显升高，miR-130ainhibitor的表达水平明显减低,转染效果明显，差异具有统计学意义（P＜0.01）。miR-NC组较对照组miR-130a的表达水平无明显变化（图3A）。给予上述3组细胞80μg/mL的ox-LDL刺激24h，对照组不进行转染，直接使用80μg/mL的ox-LDL刺激细胞24h。使用RT-qPCR对PPAR-γ的mRNA表达量进行检测，结果显示，与对照组和miR-NC组相比，miR-130amimic抑制了PPAR-γ的mRNA水平的表达，而miR-130ainhibitor促进了PPAR-γ的mRNA的表达，差异均具有统计学意义（P＜0.01）；miR-NC与对照组之间PPAR-γ的mRNA的表达无明显差异（图3B）。Westernblot检测PPAR-γ蛋白表达差异，结果显示，与对照组相比，miR-130amimic组PPAR-γ蛋白表达降低，miR-130ainbibitor组PPAR-γ蛋白表达升高；且较miR-NC组相比，PPAR-γ表达差异均有统计学意义。（P＜0.001）miR-NC组与对照组相比，PPAR-γ蛋白表达无明显差异（图3C、D）。说明miR-130a抑制了PPAR-γ在mRNA及蛋白水平的表达。图3miR-130a对HCAECsPPAR-γ表达产生的影响A.使用miR-130a模拟物、抑制物和转染阴性对照转染细胞后miR-130a的表达；B.miR-130a在mRNA水平对PPAR-γ表达的影响；C.miR-130a对PPAR-γ蛋白水平表达的影响。D.PPAR-γ的相对蛋白表达量。注：*表示与对照组相比，#表示与miR-NC组相比。**、##，P<0.01，***、###，P＜0.001。
4.miR-130a 促进 ox-LDL 诱导损伤后 HCAECs 细胞的炎症反应 使用 mi R-130a mimic、mi R-130a inhibitor、mi R-NC 转染细胞 48h，再给予 80μg/mL的 ox-LDL 刺激细胞 24h，对照组不转染，直接给与 80μg/mL 的 ox-LDL 刺激 24h。我们使用 ELISA 法检测炎性 IL-6、IL-1β 及 TNF-α 的表达，结果显示，与对照组相比，mi R-130a mimic 组炎性因子 IL-6、IL-1β 及 TNF-α 的表达明显升高（P＜0.001），mi R-130a inhibitor 组炎性因子的表达明显降低，差异具有统计学意义（P＜0.01）。与 mi R-NC 组相比，mi R-130a mimic 组炎性因子 IL-6、IL-1β 及 TNF-α 的表达升高（P＜0.01），mi R-130a inhibitor 组炎性因子的表达降低（P＜0.01），mi R-NC 组与对照组相比无统计学差异（图 4）。说明了 mi R-130a 的过表达促进内皮细胞损伤后炎症因子的释放。
【参考文献】：
期刊论文
[1]miRNA与动脉粥样硬化炎症机制研究进展[J]. 顾燕妮,谢春毅. 中国免疫学杂志. 2019(20)
[2]颈动脉和冠状动脉粥样硬化的对比分析[J]. 沈胤伯,谭博,薛傑元,白佳润,沈玲红. 医学综述. 2018(22)
[3]年轻与老年小鼠血管内皮细胞microRNA的差异表达[J]. 张俊斌,朱小南,崔进,陈鹏,王深明,王劲松. 中华医学杂志. 2012 (31)
本文编号：3480026
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
正常冠脉内皮形态学表现（×100）；Box-LDL刺激后冠脉内皮损伤形态学表现（×100）
青岛大学硕士学位论文193.miR-130a抑制PPAR-γ的表达使用miR-130amimic、miR-130ainhibitor、miR-NC转染细胞48h后，使用RT-qPCR检测转染效果，结果显示，与对照组和miR-NC组相比，miR-130amimic组miR-130a的表达水平明显升高，miR-130ainhibitor的表达水平明显减低,转染效果明显，差异具有统计学意义（P＜0.01）。miR-NC组较对照组miR-130a的表达水平无明显变化（图3A）。给予上述3组细胞80μg/mL的ox-LDL刺激24h，对照组不进行转染，直接使用80μg/mL的ox-LDL刺激细胞24h。使用RT-qPCR对PPAR-γ的mRNA表达量进行检测，结果显示，与对照组和miR-NC组相比，miR-130amimic抑制了PPAR-γ的mRNA水平的表达，而miR-130ainhibitor促进了PPAR-γ的mRNA的表达，差异均具有统计学意义（P＜0.01）；miR-NC与对照组之间PPAR-γ的mRNA的表达无明显差异（图3B）。Westernblot检测PPAR-γ蛋白表达差异，结果显示，与对照组相比，miR-130amimic组PPAR-γ蛋白表达降低，miR-130ainbibitor组PPAR-γ蛋白表达升高；且较miR-NC组相比，PPAR-γ表达差异均有统计学意义。（P＜0.001）miR-NC组与对照组相比，PPAR-γ蛋白表达无明显差异（图3C、D）。说明miR-130a抑制了PPAR-γ在mRNA及蛋白水平的表达。图3miR-130a对HCAECsPPAR-γ表达产生的影响A.使用miR-130a模拟物、抑制物和转染阴性对照转染细胞后miR-130a的表达；B.miR-130a在mRNA水平对PPAR-γ表达的影响；C.miR-130a对PPAR-γ蛋白水平表达的影响。D.PPAR-γ的相对蛋白表达量。注：*表示与对照组相比，#表示与miR-NC组相比。**、##，P<0.01，***、###，P＜0.001。
4.miR-130a 促进 ox-LDL 诱导损伤后 HCAECs 细胞的炎症反应 使用 mi R-130a mimic、mi R-130a inhibitor、mi R-NC 转染细胞 48h，再给予 80μg/mL的 ox-LDL 刺激细胞 24h，对照组不转染，直接给与 80μg/mL 的 ox-LDL 刺激 24h。我们使用 ELISA 法检测炎性 IL-6、IL-1β 及 TNF-α 的表达，结果显示，与对照组相比，mi R-130a mimic 组炎性因子 IL-6、IL-1β 及 TNF-α 的表达明显升高（P＜0.001），mi R-130a inhibitor 组炎性因子的表达明显降低，差异具有统计学意义（P＜0.01）。与 mi R-NC 组相比，mi R-130a mimic 组炎性因子 IL-6、IL-1β 及 TNF-α 的表达升高（P＜0.01），mi R-130a inhibitor 组炎性因子的表达降低（P＜0.01），mi R-NC 组与对照组相比无统计学差异（图 4）。说明了 mi R-130a 的过表达促进内皮细胞损伤后炎症因子的释放。
【参考文献】：
期刊论文
[1]miRNA与动脉粥样硬化炎症机制研究进展[J]. 顾燕妮,谢春毅. 中国免疫学杂志. 2019(20)
[2]颈动脉和冠状动脉粥样硬化的对比分析[J]. 沈胤伯,谭博,薛傑元,白佳润,沈玲红. 医学综述. 2018(22)
[3]年轻与老年小鼠血管内皮细胞microRNA的差异表达[J]. 张俊斌,朱小南,崔进,陈鹏,王深明,王劲松. 中华医学杂志. 2012 (31)
本文编号：3480026
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/xxg/3480026.html
最近更新
教材专著
