SLC22A3基因intron7对基因转录的负性调节作用研究

发布时间：2021-11-28 13:25

　　目的：研究人SLC22A3基因intron7及其SNP位点rs204832（7A/G）对基因转录的调节作用。方法：以包含人SLC22A3基因全长序列的细菌人工染色体（BAC）为模板，PCR扩增人SLC22A3intron7，克隆入荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic和pGL3-Promoter，得到野生型重组质pGL3-Basic-SLCi7wt和pGL3-Promoter-SLCi7wt；以pGL3-Promoter-SLCi7wt为模板，行PCR定点诱变，构建突变型重组质粒pGL3-Promoter-SLCi7mut。重组质粒与内参质粒pRL-SV40共转染人胚肾细胞HEK293T，24h后检测荧光素酶活性。利用统计软件SPSS17.0分析各组荧光素酶活性之间的差异。结果：成功构建了包含野生型和突变型人SLC22A3intron7的重组质粒pGL3-Basic-SLCi7wt、 pGL3-Promoter-SLCi7wt以及pGL3-Promoter-SLCi7mut。野生型重组质粒pGL3-Basic-SLCi7wt荧光素酶活性与pGL3-Basic无显著差异（P=0.986... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

人SLC22A3基因intron7PCR产物

变型 hSLC22A3 intron7 重组质粒的构建突变型重组质粒的酶切鉴定野生型重组质粒 pGL3-Promoter-SLCi7wt 为模板，行 PCR 定点诱变重组质粒 pGL3-Promoter-SLCi7mut；重组质粒行 HindIII 酶切鉴定，1%琼脂糖凝胶电泳可见：pGL3-Promoter-SLCi7mut 酶切后得到 727 b580 bp 和 5471 bp 四条 DNA 条带，酶切鉴定结果与理论预期一致（图突变型重组质粒的测序验证组质粒经测序验证，结果显示：SNP 位点 rs2048327 碱基由野生型（型（G），与预期一致（图 3），提示突变型重组质粒构建成功。

1 2 3 41: pGL3-Control（阳性对照）; 2：pGL3-Promoter（阴性对照）;3：pGL3-Promoter-SLCi7wt; 4: pGL3-Promoter-SLCi7mut.图 5 pGL3-Promoter 重组质粒荧光素酶活性(x± s )fig.5 The luciferase activities detected from HEK293Tcells transfected with pGL3-Promoter recombinant plasmids ( ± s )D 是一种具有严重危害性的多基因遗传性疾病，对其易感基因及遗传具有重要意义。2009 年 Trégou t 等首次提出 SLC22A3 基因为 CAD

【参考文献】：
期刊论文
[1]SLC22A3-LPAL2-LPA基因单核苷酸多态性与冠心病的关系研究[J]. 丁艳辉,柳青,雷寒.  第三军医大学学报. 2010(22)



本文编号：3524506