脂钙蛋白-2在肺动脉高压中的作用研究
发布时间：2021-12-17 03:56
因异常的肺动脉平滑肌细胞增生、迁移以及对凋亡的抵抗引起的小肺动脉重构是肺动脉高压的重要病理特征。然而,正常的肺动脉平滑肌细胞增生与凋亡之间的平衡如何被破坏,如何转变为高增生倾向并抵抗凋亡,其中的细胞和分子机制仍不明确。最近在恶性疾病中的研究表明,由不同原因导致的内质网应激可能是促使细胞恶性转化的共同因素。联系到各种类型的肺动脉高压均存在不同程度的内质网应激,后者可能在肺动脉平滑肌细胞的增生性转化中发挥重要作用。脂钙蛋白-2（Lipocalin2, Lcn2）,又被称为中性粒细胞明胶酶相关的Lipocalin （NGAL）,近来发现其在很多良恶性疾病中对细胞的生存发挥重要作用。Lcn2可促进细胞摄取铁,而铁可促进细胞氧化应激；Lcn2可促进细胞迁移和侵袭,并促进细胞恶性转化；针对不同类型的细胞,Lcn2具有促进或抑制凋亡的作用。Lcn2的这些功能作用均与肺动脉高压时发生的病理变化密切相关,而目前尚未见Lcn2与肺动脉高压相关的研究报道,这促使我们对Lcn2在肺动脉高压中的可能作用展开研究。本研究主要考察了Lcn2对肺动脉平滑肌细胞凋亡、增生、迁移的影响,以及相关的分子机理；考察了在野百合...
【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：84 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图I-ITUNEL法检测Lcn2对HPASMC凋亡的作用:应用血清撤退(SD)、过氧化氢
图1-2 TUNEL法检测Lcn2对HPASMC调亡的作用——定量分析：卜:TUNEL丨，测川麓机选取5个i(;j倍视野(400X )，计兑HPASMC卞?均岡丨、:率。*? p<0.05。2 Lcn2抑制Caspase-3裂解和活性Caspase-3作为多种凋1、:通路的共同环丨Y和?奶的闕Cr效应分f，在细胞闕亡屮作⑴。我们检测了 3种凋亡投:?屮，足Lcn2抑制细胞调Caspase-3 Yj'义。來丨11 Western-Blot的力?法，我们分析/ Caspase-3及il:裂解生成的；性片段（C-casp3，17Kd),结果农明Lcn2处理组的C-casp3条带均较对照组减弱，即Lcn2抑制了 Caspase-3的裂解沾化。定.?分析及叫抑制作Wj均H?有显著性（丨到1-5A)。3种丨)丨彳：！亡模嘲屮，对Caspase-3 _沾作的检测Hi农明Lcn2显普抑制了 Caspase-3 的沾化（阁 1-5B)。17
丨I、:余孔小.处现，rrc孵ff 20分钟；(2)弃坊养液，PBS洗2次/|1，0.25%胰酶消化细胞，■悬T细胞培界液巾(1-10X 106 cell/ml： Iif以存血沾和盼红）；(3)加入1:?的JC-1染色丨：作液，颠倒数次37T:_i^"20分钟；(4) 4°C、1000 rpm离心细胞5分钟，介」?.沾?，用冰冷的JC-1染色缓冲液（IX)洗潘细胞2次jTi，适M JC-1染色缓冲液（IX) Sty;细胞；(5)采丨丨j常用的检测红绿色炎光的参数，流式细胞仪检测相应样品的炎光强度。4.6 RT^PCR 用引物 Human GRP78 forward 5，- GAACGTCTGATTGGCGATGC -3’Human GRP78 reverse 5'- ACCACCTTGAACGGCAAGAA -3’Human Nogo forward 5'- GAGGGTGAGTCACGCCAAA -3’Human Nogo reverse 5，- TCCCGGAACAATGAGACTGC -3'Human (3-actin forward 5 TGTTTGAGACCTTCAACACC -3 ’Human p-actin reverse 5'- TGTTTGAGACCTTCAACACC -3’Ki67 DAPI merge
本文编号：3539361
【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：84 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图I-ITUNEL法检测Lcn2对HPASMC凋亡的作用:应用血清撤退(SD)、过氧化氢
图1-2 TUNEL法检测Lcn2对HPASMC调亡的作用——定量分析：卜:TUNEL丨，测川麓机选取5个i(;j倍视野(400X )，计兑HPASMC卞?均岡丨、:率。*? p<0.05。2 Lcn2抑制Caspase-3裂解和活性Caspase-3作为多种凋1、:通路的共同环丨Y和?奶的闕Cr效应分f，在细胞闕亡屮作⑴。我们检测了 3种凋亡投:?屮，足Lcn2抑制细胞调Caspase-3 Yj'义。來丨11 Western-Blot的力?法，我们分析/ Caspase-3及il:裂解生成的；性片段（C-casp3，17Kd),结果农明Lcn2处理组的C-casp3条带均较对照组减弱，即Lcn2抑制了 Caspase-3的裂解沾化。定.?分析及叫抑制作Wj均H?有显著性（丨到1-5A)。3种丨)丨彳：！亡模嘲屮，对Caspase-3 _沾作的检测Hi农明Lcn2显普抑制了 Caspase-3 的沾化（阁 1-5B)。17
丨I、:余孔小.处现，rrc孵ff 20分钟；(2)弃坊养液，PBS洗2次/|1，0.25%胰酶消化细胞，■悬T细胞培界液巾(1-10X 106 cell/ml： Iif以存血沾和盼红）；(3)加入1:?的JC-1染色丨：作液，颠倒数次37T:_i^"20分钟；(4) 4°C、1000 rpm离心细胞5分钟，介」?.沾?，用冰冷的JC-1染色缓冲液（IX)洗潘细胞2次jTi，适M JC-1染色缓冲液（IX) Sty;细胞；(5)采丨丨j常用的检测红绿色炎光的参数，流式细胞仪检测相应样品的炎光强度。4.6 RT^PCR 用引物 Human GRP78 forward 5，- GAACGTCTGATTGGCGATGC -3’Human GRP78 reverse 5'- ACCACCTTGAACGGCAAGAA -3’Human Nogo forward 5'- GAGGGTGAGTCACGCCAAA -3’Human Nogo reverse 5，- TCCCGGAACAATGAGACTGC -3'Human (3-actin forward 5 TGTTTGAGACCTTCAACACC -3 ’Human p-actin reverse 5'- TGTTTGAGACCTTCAACACC -3’Ki67 DAPI merge
本文编号：3539361
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