Brugada综合征患者特异性诱导多能干细胞系的建立及鉴定

发布时间：2021-12-17 11:35

　　目的:分离Brugada综合征（Brugada Syndrome,BrS）患者外周血单核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC）建立特异性诱导的多能干细胞（Induced pluripotent Stem cells,iPSC）系,为后期探讨BrS的发病机制提供疾病模型。方法:从一例明确诊断BrS的患者中收集外周静脉血,分离PBMC。将包含四个特异性因子OCT4,SOX2,KLF4和CMYC的仙台病毒转染到PBMC。通过免疫荧光染色、流式细胞技术、三胚层分化等方法检测iPSC的多功能性。通过Giemsa染色技术进行iPSC核型分析。通过STR分析鉴定iPSC细胞生长情况。结果诱导的iPSC呈典型的胚胎干细胞样克隆,符合干细胞的基本特性。其次iPSC具有三胚层分化发育能力。结论iPSC能够通过人的PBMC获得并且具有能够分化为多种类型细胞的能力,此特点为进一步研究BrS发病机制提供了完整而有价值的实验建模方法。并为后续将iPSC定向分化为心肌细胞,研究BrS的发病机制、治疗方法奠定了基础。 

【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区

【文章页数】：41 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

外周血单个核细胞的形态

新疆医科大学硕士学位论文11结果1外周血单个核细胞的生成我们通过相关实验过程从BrS病人的外周血，成功分离出PBMC。在显微镜下可以见到大量生长活跃，圆形、体积较孝呈现出贴壁生长的PBMC，且数量大量增加。（见图1）图1外周血单个核细胞的形态Fig.1MorphologyofPBMC2BrS来源iPSC的生成我们用BrS患者的外周血单个核细胞成功的诱导出了iPSC，并在显微镜下观察到大量干细胞一样的克隆状态。细胞正在活跃地生长，拥有明显的细胞结构，并且其数目正在显着增加。（见图2）图2iPSC的克隆细胞团Fig.2iPSCclonedcellmass

新疆医科大学硕士学位论文14c.内胚层(AFP)Hoechst染色细胞核。Merge为重叠图片。a.外胚层(PAX-6)染色结果。b.中胚层(Brachyury)染色结果。c.内胚层(AFP)染色结果。比例尺=50μm。Hoechststainednuclei.Mergeisanoverlappingpicture.a.FluorescenceimageofEtodermccells(PAX-6).b.FluorescenceimageofMesodermcells(Brachyury).c.FluorescenceimageofEdodermcells(AFP).Scale=50μm.n图5iPSC体外三胚层分化能力Fig.5Three-germlayersofiPSC4核型鉴定为了检查衍生的iPSC的遗传稳定性，使用标准的细胞遗传学技术进行了核型分析。通过吉姆萨染色检查iPSC系的核型，结果显示正常的二倍体46,XY核型，未发现任何异常。（如图6）图6BrSiP-SCs染色体核型分析Fig.6ThekaryotypeoftheiPSC

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3540037