核仁素对microRNAs的调控及其在心肌保护中的作用

发布时间：2021-12-19 10:01

　　目的：筛选核仁素调控的miRNAs,在心肌损伤模型中观察核仁素及其调控的miRNAs在心肌保护中的作用,探讨核仁素是否通过调控miRNA的生成在损伤心肌中发挥保护作用,初探核仁素调控miRNAs的可能机制。方法：通过核仁素转基因小鼠,采用高通量技术筛选出受核仁素调控的miRNAs,并通过qRT-PCR（实时定量-逆转录-多聚酶链反应）进行验证。构建小鼠阿霉素心肌损伤与心肌缺血-再灌注损伤模型,通过Western-blot及qRT-PCR检测核仁素及其调控的miRNA在这两种模型中的表达情况。采用核仁素过表达或表达抑制以及“获得或失去功能实验”（gain-and loss of-function experiment）观察核仁素及其调控的miRNAs对阿霉素、H2O2所致的心肌细胞损伤的影响,观察核仁素是否通过调控miRNAs生成在损伤心肌细胞中发挥保护作用。通过生物信息学软件预测重要miRNAs的靶mRNAs,并观察其在阿霉素处理的心肌细胞中的表达情况,旨在寻找miRNAs可能的作用靶点。通过RNA免疫共沉淀技术（RNA-IP）和蛋白质免疫共沉淀技术（IP）筛选心肌组织中与核仁素发生相... 

【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：118 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

心肌特异性高表达核仁素小鼠的建立与鉴定

图1-2.高通量歸选核仁素转基因小鼠和野生型小鼠心肌组织中差异表达miRNAsFig 1-2. Thermal map of differentially expressed miRNAs between nucleolin transgenic wild type mice .表1 miRNAs芯片显示，核仁素转基因小鼠心肌中表达上调的miRNAsTablel. Up-regulated miRNAs in myocardium of nucleolin transgenic miceNo. Name Regulation No. Name Regulation1 ninui-miR-320 up 9 niiiiii-iniR-29b up2 niinu-miR-21 up 10 niiiiu-niiR-208b up3 niiiiu-miR-146b up 11 mimi-miR-29a* up4 immx-miR-223 up 12 nmiu-miR-222 up5 iiiimi-miR-214 up 13 niiiiu-miR-146a up6 minu-iniR-195 up 14 mmu-miR-214* up7 niiiiu-imR-19ya-5p up 15 iiiiiiu-miR-34a up8 imiiu-miR-690 up 16 niniu-miR-27a up

位论文 qRT-PCR验证基因芯片中两组之间表达差异的miRNAs高通量蹄选是一种以初蹄为目的的蹄选技术，往往需要进一步验证明两组之间差异表达的miRNAs,我们采用qRT-PCR分146b, miR-320, miR21, miR-1, miR-133, miR-378。发现 miR-320 片结果一致，在核仁素转基因小鼠心肌组织中表达上调（图1-3A)，378与芯片结果一致，在核仁素转基因小鼠心肌组织中表达下调（miR-21在两组之间差异具有显著性，尸<0.01,论3。A rm WT

【参考文献】：
期刊论文
[1]miRNA-711-SP1-collagen-I pathway is involved in the anti-fibrotic effect of pioglitazone in myocardial infarction[J]. ZHAO Na,YU HaiYi,YU HaiTao,SUN Min,ZHANG YouYi,XU Ming,GAO Wei.  Science China（Life Sciences）. 2013(05)



本文编号：3544220