BAG3与MALAT1在心肌生理性肥大和心肌病理性肥大中的不同作用及机制研究

发布时间：2021-12-23 16:47

　　背景:多种心脏疾病可以引起心力衰竭,心力衰竭是世界范围内引起死亡的主要原因之一。外界刺激可以使心脏发生生理性肥大反应或病理性肥大反应(又称为生理性重塑或病理性重塑)。生理性肥大是可逆的,有助于维持正常的心脏功能。生理性肥大主要表现为心肌细胞的适应性生长,伴随着心肌肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA2a)等有益蛋白表达上调以及血管生成增加,且不会出现ANP、ACTC以及Myh7等胎儿基因的激活和心肌纤维化。然而,病理性肥大是不可逆的,可以使心脏功能恶化并最终引起心力衰竭。病理性肥大主要表现为心肌细胞的非适应性生长、凋亡增加并伴随有胎儿基因激活和心肌纤维化。在许多心脏疾病的早期,心肌生理性肥大及病理性肥大同时存在。因此,研究影响心脏有益和有害两种肥大的影响因素和机制对于治疗多种心脏疾病,预防心力衰竭具有重要意义。BAG3是一种在心脏、骨骼肌和一些肿瘤中高表达的蛋白质,可以调控包括发育、凋亡、自噬以及肿瘤发生发展等多个生物学过程。越来越多的研究表明BAG3在心脏中也具有重要作用,它可以促进心肌中异常折叠蛋白质及受损细胞器的降解、抑制心肌细胞凋亡、维持心肌Z-盘的结构完整性、调节心肌收缩力以...

【文章来源】： 中国医科大学辽宁省

【文章页数】：106 页

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :BAG3在心肌生理性肥大和心肌病理性肥大中的作用及机制研究
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 心脏特异性BAG3纯合与杂合鼠的构建
        2.2 小鼠游泳训练
        2.3 小鼠皮下埋泵(持续泵入苯肾上腺素)
        2.4 超声心动图
        2.5 苏木素-伊红(H&E)染色
        2.6 Masson染色
        2.7 原代心肌细胞分离、培养及处理
            2.7.1 原代心肌细胞分离与纯化
            2.7.2 原代心肌细胞的接种与培养
            2.7.3 原代心肌细胞处理
        2.8 原代心肌细胞转染
        2.9 细胞核组分与细胞浆组分的分离
        2.10 Western blot
            2.10.1 总蛋白提取
            2.10.2 蛋白定量
            2.10.3 蛋白配置及准备
            2.10.4 SDS-PAGE电泳及转膜
            2.10.5 封闭及抗体孵育
            2.10.6 发光
            2.10.7 使用到的抗体
        2.11 免疫荧光
        2.12 数据处理及统计学方法
        2.13 常用试剂配置、使用仪器及耗材清单
    3 结果
        3.1 心肌细胞生理性肥大和病理性肥大的表现
        3.2 小鼠心脏生理性肥大和病理性肥大的表现
        3.3 BAG3的表达在体内和体外的生理性肥大与病理性肥大中上调
        3.4 心脏特异性BAG3纯合与杂合敲除鼠的构建
        3.5 心脏特异性BAG3纯合与杂合敲除鼠的心脏表现特点
        3.6 BAG3可以在体外促进心肌生理性肥大
        3.7 BAG3可以在体内促进心肌生理性肥大
        3.8 BAG3可以在体外抑制心肌病理性肥大
        3.9 BAG3可以在体内抑制心肌病理性肥大
        3.10 BAG3 通过Akt-mTOR通路介导心肌生理性肥大
        3.11 BAG3 通过calcineurin-NFAT通路抑制心肌病理性肥大
    4 讨论
    5 结论
    参考文献
第二部分 :MALAT1在心肌生理性肥大和心肌病理性肥大中的作用及机制研究
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 细胞培养与处理
        2.2 细胞转染
        2.3 实时定量PCR(qRT-PCR)
            2.3.1 提取总RNA
            2.3.2 RNA浓度及纯度测定
            2.3.3 逆转录
            2.3.4 实时定量PCR
        2.4 Western blot
            2.4.1 总蛋白提取
            2.4.2 蛋白定量
            2.4.3 蛋白配置及准备
            2.4.4 SDS-PAGE电泳及转膜
            2.4.5 封闭及抗体孵育
            2.4.6 发光
            2.4.7 使用到的抗体
        2.5 荧光素酶报告基因
        2.6 数据处理及统计学方法
        2.7 常用试剂配置
    3 结果
        3.1 MALAT1的表达在生理性肥大和病理性肥大的细胞中升高
        3.2 敲减MALAT1抑制了心肌病理性肥大,而对生理性肥大无明显作用
        3.3 MALAT1与microRNA-26a之间的相互作用
        3.4 敲减MALAT1 通过mi R-26a抑制了GATA4 蛋白的表达
        3.5 MALAT1对PE诱导的心肌病理性肥大的影响是通过mi R-26a介导的
    4 讨论
    5 结论
    参考文献
本研究的创新性自我评价
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]Pro?ling and Validation of the Circular RNA Repertoire in Adult Murine Hearts [J]. Tobias Jakobi,Lisa F.Czaja-Hasse,Richard Reinhardt,Christoph Dieterich.  Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2016(04)



本文编号：3548830