Toll样受体4/核转录因子-κB信号通路促进高磷诱导血管平滑肌细胞钙化

发布时间：2021-12-24 16:37

　　目的探讨Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）/核转录因子-κB（nuclear transcription factorκB,NF-κB）信号通路对高磷诱导小鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）成骨样分化以及血管钙化过程的影响。方法体外培养小鼠血管平滑肌细胞系。首先将实验分为正常对照组和高磷组,观察高磷对VSMCs的影响;其次分为正常对照组、NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯（pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC）组（PDTC组）、高磷组和高磷+PDTC组,观察PDTC对高磷诱导的VSMCs成骨样分化及钙化的抑制作用;最后分为正常对照组、正常对照+control siRNA组、正常对照+TLR4 siRNA组、高磷组、高磷+control siRNA组、高磷+TLR siRNA组,观察TLR4基因的小分子干扰RNA（siRNA）对高磷诱导的VSMCs成骨样分化及钙化的抑制作用。采用茜素红S染色观察高磷对细胞钙盐沉积的影响,Western blot检测TLR4、p-NF-... 

【文章来源】：第三军医大学学报. 2017,39(08)北大核心CSCD

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【部分图文】：

茜素红S染色观察2组VSMCs钙盐沉积情况(×200)

吡鬃?图1茜素红S染色观察2组VSMCs钙盐沉积情况(×200)2．2高磷对VSMCs表型蛋白表达的影响Westernblot检测结果显示，与正常对照组相比，高磷孵育后，高磷组的TLR4、p-NF-κB表达明显升高(P＜0.01)，与成骨样分化及钙化相关的BMP2、Runx2蛋白表达明显上调(P＜0.01)，而平滑肌细胞标志物SM22α表达则明显减少(P＜0.01，图2)。表明高磷可诱导血管平滑肌细胞向成骨样细胞表型转换，同时高磷也上调了TLR4和p-NF-κB蛋白的表达。1:正常对照组;2高磷组A:Westernblot检测结果;B:半定量分析结果a:P＜0.01，与正常对照组比较图2Westernblot检测各组血管平滑肌细胞蛋白表达http://aammt．tmmu．edu．cn第三军医大学学报，2017，39(8)733

2．3NF-κB抑制剂PDTC对高磷诱导VSMCs钙盐沉积的影响为进一步研究NF-κB在高磷诱导血管平滑肌细胞钙化中的作用，使用NF-κB抑制剂PDTC处理血管平滑肌细胞。VSMCs细胞爬片的茜素红S染色结果显示，与高磷组相比，经过NF-κB抑制剂PDTC预孵育组的VSMCs钙盐沉积明显减轻(图3)。半定量检测结果显示，高磷+PDTC组光密度值明显低于高磷组［(0．121±0．013)vs(0．217±0．031)，P＜0.01］。A:正常对照组;B:PDTC组;C:高磷组;D:高磷+PDTC组图3茜素红S染色观察各组VSMCs钙盐沉积情况(×200)2．4NF-κB抑制剂PDTC对高磷诱导的VSMCs表型蛋白表达的影响Westernblot检测结果显示，与高磷组相比，NF-κB抑制剂PDTC预孵育后，高磷+PDTC组的p-NF-κB表达明显下调(P＜0.01)。与成骨样分化及钙化相关的BMP2和RUNX2蛋白的表达也相应下降(P＜0.01)，而平滑肌细胞标志物SM22α的表达则显著上升(P＜0.01)。提示在使用了NF-κB抑制剂PDTC预孵育后，p-NF-κB的表达明显减少，同时抑制了高磷诱导VSMCs成骨样分化和钙化(图4)。表明NF-κB参与高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化。1:正常对照组;2:PDTC组;3:高磷组;4:高磷+PDTC组A:Westernblot检测结果;B:半定量分析结果a:P＜0.001，与高磷组比较图4Westernblot检测各组血管平滑肌细胞蛋白表达2．5转染TLR4小分子干扰RNA对高磷诱导VSMCs表型蛋白表达的影响Westernblot检测结果显示，与高磷组相比，转染TLR4小分子干扰RNA后，VSMCs的TLR4［(0．117±0．047)vs(0．377±0．012)，P＜0.01］表达明显受到抑制，与此同时，p-NF-κB［(0．264±0．013)vs(0．601±0．027)，P＜0.01］的表达也相应下降。与成骨样分化及钙化相关的BMP2和RUNX2蛋白的表达下调(P＜0.01)，平滑肌细胞标志物SM22α的表达则显著上升(P?


本文编号：3550832