羟基脲通过P38MAPK信号诱导K562细胞γ-珠蛋白表达的调控机制研究
发布时间：2021-12-31 03:08
目的:探讨羟基脲诱导K562细胞γ-珠蛋白表达过程中P38MAPK信号的调控作用及机制,为明确羟基脲诱导γ-珠蛋白表达的作用机制提供新的实验依据。方法:将终浓度设为0μM、100μM、200μM、300μM、400μM的羟基脲分别作用于K562细胞,选取4个不同观察时间点（24h、48h、72h、96h）进行检查。RT-PCR检测不同浓度羟基脲作用不同时间后K562细胞γ-珠蛋白基因mRNA表达水平;CCK-8试剂盒检测不同浓度羟基脲作用不同时间后K562细胞存活率;流式细胞术检测不同浓度羟基脲作用后K562细胞凋亡率,筛选出羟基脲最佳作用浓度和时间,并以该条件评估羟基脲作用后BCL11A等相关转录因子表达的差异性。随后设立羟基脲实验组、羟基脲+SB203580实验组、等体积SB203580抑制剂组和PBS阴性对照组,采用RT-PCR进一步检测γ-珠蛋白基因、P38MAPK以及相关转录因子基因mRNA表达水平,western blot检测γ-珠蛋白、P38MAPK总蛋白和磷酸化蛋白表达水平。结果:1、筛选羟基脲最佳作用浓度和时间,结果显示不同浓度、时间作用下K562细胞γ-珠蛋白基因m...
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同浓度羟基脲诱导K562细胞24h、48h、72h、96h，γ-珠蛋白基因mRNA表达的浓度与时间交互作用图
互作用（F=11.779，P=0.001）。随着药物浓度的增K562 细胞存活率逐渐下降，其中相同浓度不同时间具有统计学意义（P=0.000）；相同时间不同浓度之有统计学意义（P=0.000），见表 3-2 和图 3-2。表 3-2 不同浓度羟基脲作用不同时间K562 细胞存活率情况（ X±S，n=3 ）24h 48h 72h 96h.891±0.031* 0.864±0.016* 0.847±0.027* 0.619±0.845±0.025* 0.710±0.023* 0.620±0.016* 0.456±0.790±0.055* 0.643±0.015* 0.481±0.018* 0.360±0.720±0.037* 0.594±0.010* 0.421±0.020* 0.295±0时间之间两两比较，*P<0.001；相同时间不同浓度之间两两比较，
统计学意义（F=3.802,P=0.039，F=6.298,P=0.043，F=7.709,P=0.004）。羟基脲作用7h后，K562细胞凋亡率存在浓度依赖性，浓度越大，细胞凋亡率越大，见表3-3和图3-3。表3-3 不同浓度羟基脲作用K562细胞72h后细胞凋亡率比较（X±S，n=3）浓度（μM） Q3(早期凋亡,%) Q2(晚期凋亡,%) Q3+ Q2(总凋亡，%)0 3.58±0.95 0.22±0.33 3.81±0.92100200300400F 值P 值4.53±1.74 0.33±0.74 4.86±1.665.27±1.63 0.48±0.10 5.75±1.536.69±1.72 0.89±0.41 7.58±1.397.96±1.55 1.32±0.68 9.28±1.183.802 6.298 7.7090.039 0.043 0.004A B CD E图 3-3 不同浓度羟基脲作用 K562 细胞 72h，细胞凋亡率情况 A:0μM B：100μM C：200μMD：300μM E：400μMFigure3-3 The apoptosis rate in K562 cells with different concentrations hydroxyurea in
【参考文献】：
期刊论文
[1]地中海贫血致病机制及基因治疗进展[J]. 杜萌,朱宝生,吕涛. 医学动物防制. 2017(01)
[2]β地中海贫血的基因突变类型及临床表现型特点[J]. 王葭. 现代诊断与治疗. 2016(13)
[3]姜黄素通过MAPK信号通路诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡[J]. 李会宣,杨虹,张红兵,高健. 天然产物研究与开发. 2014(03)
[4]β地中海贫血的珠蛋白基因诱导疗法[J]. 卢焯明. 中国实验血液学杂志. 2014(01)
[5]重型β地中海贫血的输血治疗[J]. 周亚丽,张新华. 中国小儿血液与肿瘤杂志. 2012(02)
[6]中国不同省区β地中海贫血基因变异的分布特征[J]. 石西南,褚嘉祐,杨昭庆. 医学综述. 2011(04)
[7]地中海贫血的规范化输血治疗[J]. 朱易萍. 中国输血杂志. 2010(01)
[8]湖南地区206例儿童β-地中海贫血基因突变类型分析[J]. 李婉丽,邹爱军,杨海霞,蒋小梅,张本山,吴攀,郑敏翠,宋国才. 中医儿科杂志. 2009(03)
[9]中国人β地中海贫血的分子基础及产前诊断[J]. 周玉球,徐湘民. 国外医学.遗传学分册. 1995(03)
博士论文
[1]p38 MAPK信号对γ珠蛋白基因启动子区域表观遗传修饰的作用[D]. 陈剑锋.南方医科大学 2010
本文编号：3559508
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同浓度羟基脲诱导K562细胞24h、48h、72h、96h，γ-珠蛋白基因mRNA表达的浓度与时间交互作用图
互作用（F=11.779，P=0.001）。随着药物浓度的增K562 细胞存活率逐渐下降，其中相同浓度不同时间具有统计学意义（P=0.000）；相同时间不同浓度之有统计学意义（P=0.000），见表 3-2 和图 3-2。表 3-2 不同浓度羟基脲作用不同时间K562 细胞存活率情况（ X±S，n=3 ）24h 48h 72h 96h.891±0.031* 0.864±0.016* 0.847±0.027* 0.619±0.845±0.025* 0.710±0.023* 0.620±0.016* 0.456±0.790±0.055* 0.643±0.015* 0.481±0.018* 0.360±0.720±0.037* 0.594±0.010* 0.421±0.020* 0.295±0时间之间两两比较，*P<0.001；相同时间不同浓度之间两两比较，
统计学意义（F=3.802,P=0.039，F=6.298,P=0.043，F=7.709,P=0.004）。羟基脲作用7h后，K562细胞凋亡率存在浓度依赖性，浓度越大，细胞凋亡率越大，见表3-3和图3-3。表3-3 不同浓度羟基脲作用K562细胞72h后细胞凋亡率比较（X±S，n=3）浓度（μM） Q3(早期凋亡,%) Q2(晚期凋亡,%) Q3+ Q2(总凋亡，%)0 3.58±0.95 0.22±0.33 3.81±0.92100200300400F 值P 值4.53±1.74 0.33±0.74 4.86±1.665.27±1.63 0.48±0.10 5.75±1.536.69±1.72 0.89±0.41 7.58±1.397.96±1.55 1.32±0.68 9.28±1.183.802 6.298 7.7090.039 0.043 0.004A B CD E图 3-3 不同浓度羟基脲作用 K562 细胞 72h，细胞凋亡率情况 A:0μM B：100μM C：200μMD：300μM E：400μMFigure3-3 The apoptosis rate in K562 cells with different concentrations hydroxyurea in
【参考文献】：
期刊论文
[1]地中海贫血致病机制及基因治疗进展[J]. 杜萌,朱宝生,吕涛. 医学动物防制. 2017(01)
[2]β地中海贫血的基因突变类型及临床表现型特点[J]. 王葭. 现代诊断与治疗. 2016(13)
[3]姜黄素通过MAPK信号通路诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡[J]. 李会宣,杨虹,张红兵,高健. 天然产物研究与开发. 2014(03)
[4]β地中海贫血的珠蛋白基因诱导疗法[J]. 卢焯明. 中国实验血液学杂志. 2014(01)
[5]重型β地中海贫血的输血治疗[J]. 周亚丽,张新华. 中国小儿血液与肿瘤杂志. 2012(02)
[6]中国不同省区β地中海贫血基因变异的分布特征[J]. 石西南,褚嘉祐,杨昭庆. 医学综述. 2011(04)
[7]地中海贫血的规范化输血治疗[J]. 朱易萍. 中国输血杂志. 2010(01)
[8]湖南地区206例儿童β-地中海贫血基因突变类型分析[J]. 李婉丽,邹爱军,杨海霞,蒋小梅,张本山,吴攀,郑敏翠,宋国才. 中医儿科杂志. 2009(03)
[9]中国人β地中海贫血的分子基础及产前诊断[J]. 周玉球,徐湘民. 国外医学.遗传学分册. 1995(03)
博士论文
[1]p38 MAPK信号对γ珠蛋白基因启动子区域表观遗传修饰的作用[D]. 陈剑锋.南方医科大学 2010
本文编号：3559508
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