叙利亚金黄地鼠血管平滑肌细胞的分离、培养及鉴定

发布时间：2022-01-19 15:23

　　目的分离、培养叙利亚金黄地鼠的血管平滑肌细胞,并对其进行鉴定及生长观察。方法取3～4周龄雄性叙利亚金黄地鼠2只,处死后取主动脉,采用组织块贴壁法对血管平滑肌细胞进行分离、原代和传代培养。采用倒置相差显微镜对原代培养3 d后的细胞及前3代传代细胞进行形态学观察。取第3代对数生长期的血管平滑肌细胞,采用细胞免疫荧光技术观察平滑肌细胞特异性标志因子平滑肌肌动蛋白α（α-SMA）、平滑肌22α（SM22α）染色情况,采用CCK-8法检测细胞培养1～7 d的增殖能力（OD值）。结果原代培养3～5 d,有少量血管平滑肌细胞从组织中爬出,呈贴壁生长;原代培养7～9 d,细胞呈梭形或三角形,生命力旺盛,折光度好;原代培养9 d后,细胞增殖能力明显增强,细胞数量增多,细胞与细胞间排列紧密,出现"峰-谷"状特征;原代培养15 d左右可以进行传代培养。前3代传代细胞与原代细胞相比,形态无明显变化。细胞免疫荧光结果显示,α-SMA、SM22α将细胞质染成绿色,血管平滑肌细胞纯度> 95%。血管平滑肌细胞培养1～7 d的OD值分别为0.437 3±0.021 5、0.460 0±0.018 8、0.614... 

【文章来源】：山东医药. 2020,60(23)

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

叙利亚金黄地鼠血管平滑肌细胞α-SMA、SM22α细胞免疫荧光鉴定结果(200×)

大鼠和小鼠由于成本低、易饲养，之前多被研究者作为动脉粥样硬化的首选动物模型。但是随着研究的深入，发现大鼠糖脂代谢机制与人类相差较大[5]，而小鼠存在一次性采血量少且不能连续采血的缺点[6]。叙利亚金黄地鼠属于啮齿类动物，体型介于大鼠和小鼠之间，在1930年从中东叙利亚引进[7]。研究表明，与大鼠、小鼠比较，叙利亚金黄地鼠血浆脂蛋白谱、肝脏合成胆固醇速率以及膳食胆固醇需要量和代谢率与人类更为相似[8～11]。因此，将叙利亚金黄地鼠作为高血脂、动脉粥样硬化、糖尿病等以糖脂代谢紊乱为特征的心血管病动物模型已成为一种趋势。为了深入研究上述心血管疾病的发病机制，体外培养稳定的叙利亚金黄地鼠血管平滑肌细胞模型也逐渐成为研究热点。既往小鼠血管平滑肌细胞原代培养常采用酶消化法[12～14]，该方法价格昂贵且消化时间和配比浓度不好把控，有可能导致细胞获得量少、活性差等。因此，本研究选择组织块贴壁法[15]提取叙利亚金黄地鼠主动脉血管平滑肌细胞。在原代细胞的提取过程中，需将心血管外膜剥离干净，刮去内膜，以避免内皮细胞和成纤维细胞的污染，确保原代血管平滑肌细胞的纯度。本研究结果显示，分离提取的血管平滑肌细胞经过细胞形态学观察及细胞免疫荧光鉴定，血管平滑肌细胞纯度>95%;传代的血管平滑肌细胞培养1 d时处于增殖潜伏期，细胞增长缓慢;2～4 d处于对数生长期，增殖能力最强;5～7 d处于平台期，细胞出现生长抑制的现象，增殖能力开始降低。因此，本研究提取的血管平滑肌细胞传代后2～4 d是进行后续实验的最佳时期。

【参考文献】：
期刊论文
[1]大鼠结肠平滑肌细胞原代培养方法简化研究[J]. 刘启艳,彭玉,詹伟,冷丽.  武汉大学学报(医学版). 2020(01)
[2]Ⅰ型胶原与异丙肾上腺素调控三维培养胶上大鼠气道平滑肌细胞的分枝结构形成[J]. 钱智莉,邓林红,欧阳明星.  生物医学工程研究. 2019(03)
[3]低氧处理增强体外培养小鼠肺动脉平滑肌细胞的增殖和迁移能力[J]. 沈慧,张丽娜,姚德山,张振刚,龚开政.  细胞与分子免疫学杂志. 2019(01)

硕士论文
[1]新型金黄地鼠颈动脉粥样硬化模型的建立及影像学基础研究[D]. 刘辉.中南大学 2012



本文编号：3597098