CILP2诱导THP1源性泡沫细胞形成

发布时间：2022-02-13 22:49

　　第一部分人CILP2基因真核表达载体的构建和鉴定目的：构建人pIRES2-EGFP-CILP2-Flag质粒方法：提取HEK293细胞mRNA，逆转录成模板DNA,高保真酶PCR获取CILP2-Flag基因片段，经BglII和EcoRI双酶切，连接重组至pIRES2-EGFP空载质粒上。双酶切和基因测序鉴定质粒构建效果。结果：BglII和EcoRI双酶切重组质粒，经琼脂糖凝胶电泳，在约3.5kb和5.3kb处出现条带，初步鉴定重组质粒构建成功。测序结果经NCBI blast对比分析，核酸序列与GenBank中CILP2CDS区序列同源性完全一致，且C端正确带上Flag片段。结论：成功构建pIRES2-EGFP-CILP2-Flag标签质粒，为后续实验奠定了良好的实验基础。第二部分cilp2基因在小鼠体内表达分布和不同病理模型中的表达差异目的：检测cilp2基因在正常C57BL/6J小鼠体内的mRNA表达分布，以及在ApoE-/-小鼠和冠心病人中的mRNA和蛋白表达差异。方法：取普食喂养C57BL/6J12周龄雄性小鼠3只脱颈处死，留取心，肝，脾，胃，肌肉，脑，肾，肺组织，提取mRNA,... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

pIRES2-EGFP质粒载体信息Fig1.1pIRES2-EGFPplasmidinformation

图 1.2 重组质粒酶切鉴定nzyme digestion of pIRES2-EGFP-CIRES2-EGFP-CILP2-Flag+BglII+Eco2-EGFP-CILP2-Flag 测序鉴 测序，结果显示插入序列与 Ge完全一致，并且插入方向正确（

图 1.2 重组质粒酶切鉴定Fig1.2 Enzyme digestion of pIRES2-EGFP-CILP2-FlagpIRES2-EGFP-CILP2-Flag+BglII+EcoRⅠ2.2 重组质粒 pIRES2-EGFP-CILP2-Flag 测序鉴定2.2.1 测序结果双向法对质粒 DNA 测序，结果显示插入序列与 Genbank 数据库中检索到的CILP2 基因 CDS 区序列完全一致，并且插入方向正确（图 1.3）。

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3624060