特异性敲除心肌组织中的Lgr5在ISO诱导小鼠心肌纤维化模型中的作用及机制

发布时间：2022-02-19 16:02

　　研究背景与目的:心肌纤维化（Myocardial fibrosis,MF）是当心肌受到各种外界损伤,例如机械压力、炎症刺激和局部缺血时,发生心肌适应性重塑的过程。MF最具特征的一个病理改变则是相关炎性细胞和活化的心肌成纤维细胞（Cardiac fibroblasts,CFs）积聚,继而引起细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）的生成随之剧增。不少证据表明,以心室收缩和舒张功能障碍为特征的心力衰竭（heart failure,HF）表现出严重MF。由于HF预后较差,对大多数心血管疾病患者的健康构成极大威胁。因此,积极寻找MF有效的干预措施对延缓HF的疾病进程具有重大意义。MF的发展受多种因素的影响,其中氧化应激和炎症反应均参与其中,炎症因子,如TNF-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）、IL-6（interleukin-6,IL-6）和IL-1β等均与其发展密切相关。Lgr5是一种G蛋白偶联受体,有研究发现R-spondin能够与Lgr5结合,从而引起Wnt/β-Catenin信号转导的激活。同时,有多个研究报道,Wnt/β-Cate... 

【文章来源】：成都医学院四川省

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
实验材料
    主要实验仪器
    主要实验试剂
    配置的试剂
第一部分 ISO诱导小鼠心肌纤维化动物模型
    1 实验方法
        1.1 小鼠心肌纤维化动物模型的制造
        1.2 小鼠体重、心率、血压、心脏重量指数的检测
        1.3 Masson染色观察心肌纤维化程度
        1.4 RT-PCR检测Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ及Lgr5 mRNA的表达
        1.5 Western blotting检测Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ及Lgr5 蛋白的表达
        1.6 统计学处理
    2 实验结果
        2.1 小鼠体重、心率、血压、心脏重量指数
        2.2 Masson染色观察小鼠心肌纤维化程度
        2.3 RT-PCR检测CollagenI、CollagenⅢ及Lgr5 mRNA的表达
        2.4 Western blotting检测Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ及Lgr5 蛋白的表达
    3 讨论
第二部分 特异性敲除心肌组织中的Lgr5 对小鼠心肌纤维化的影响
    1 实验方法
        1.1 敲基因小鼠构建及基因型鉴定
        1.2 小鼠心肌纤维化动物模型的制造,具体造模方法参照同前(1.1)
        1.3 小鼠体重、心率、血压、心脏重量指数的检测,参照同前(1.2)
        1.4 小鼠心脏超声检查
        1.5 Masson及天狼星红染色观察Lgr5对心肌纤维化程度影响
        1.6 RT-PCR及 Western blotting检测特异性敲除心肌组织中的Lgr5 对collagen Ⅰ、collagen Ⅲ表达的影响
        1.7 HE染色观察Lgr5对纤维化心肌中炎症反应的影响
        1.8
        1.9 统计学处理
    2 实验结果
        2.1 小鼠基因鉴定结果
        2.2 特异性敲除心肌组织中的Lgr5 对小鼠体重、心率、血压、心脏重量指数的影响
        2.3 超声心动图检测特异性敲除心肌组织中的Lgr5 对小鼠心功能的影响
        2.4 Masson及天狼星红染色观察特异性敲除心肌组织中的Lgr5 对心肌纤维化程度的影响
        2.5 RT-PCR及 Western blotting检测特异性敲除心肌组织中的Lgr5 对collagen Ⅰ、collagen Ⅲ表达的影响
        2.6 HE染色观察特异性敲除心肌组织中的Lgr5 对纤维化心肌中炎症反应的影响
        2.7 RT-PCR及 Western blotting检测特异性敲除心肌组织中的Lgr5 对MMP1、TIMP1、IL-6、TNF-α表达的影响
    3 讨论
第三部分 特异性敲除心肌组织中的Lgr5在小鼠心肌纤维化中的作用制
    1 实验方法
        1.1 小鼠心肌纤维化动物模型的制造(1.1)
        1.2 RT-PCR检测Lgr5、wnt1、β-Catenin mRNA的表达基因引物见表 3-1
        1.3 Western blotting检测Lgr5、wnt1、β-Catenin蛋白的表达
        1.4 统计方法
    2 实验结果
        2.1 RT-PCR检测Lgr5、wnt1、β-Catenin mRNA的表达
        2.2 Western blotting检测Lgr5、wnt1、β-Catenin蛋白的表达
    3 讨论
全文讨论
全文结论
参考文献
文献综述
    参考文献
附录
攻读学位期间的研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]《中国心血管病报告2018》概要[J]. 胡盛寿,高润霖,刘力生,朱曼璐,王文,王拥军,吴兆苏,李惠君,顾东风,杨跃进,郑哲,陈伟伟.  中国循环杂志. 2019(03)
[2]两种心肌纤维化动物模型基本情况比较[J]. 徐为民,孙志,陈欢,时景伟.  中国实验诊断学. 2018(04)
[3]氧化应激致心室重构的研究进展[J]. 朱凯媛,蔡辉.  安徽医药. 2015(09)

硕士论文
[1]利用CRISPR/Cas9技术构建Hoxc13基因敲除兔模型[D]. 邓吉超.吉林大学 2018



本文编号：3633197