MircoRNA-224通过PCSK9/LOX-1途径抑制血管平滑肌细胞脂质蓄积

发布时间：2022-09-29 14:27

　　【目的】探讨miR-224（MircoRNA-224,miR-224）对人血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）脂质蓄积的影响及分子机制。【方法】（1）利用GEO数据库中基因芯片数据对小鼠动脉粥样硬化（atherosclerosis,As）斑块中的miRNA表达情况进行生物信息学分析;采用qRT-PCR检测miR-224在oxLDL处理人VSMCs中的表达情况。（2）将miR-224 mimics转染人VSMCs,再分别加入Dil-oxLDL（20μg/ml）孵育4小时或oxLDL（50μg/ml）处理24小时,采用荧光显微镜观察细胞对Dil-oxLDL的摄取、油红O染色观察细胞内脂滴以及总胆固醇（Total cholesterol,TC）检测试剂盒分析细胞内TC含量,以观察miR-224对VSMCs脂质蓄积的影响。（3）miR-224 mimics转染VSMCs后不加或加oxLDL处理,运用qRT-PCR、Western blot检测VSMCs上清道夫受体LOX-1表达的情况,利用生物信息学方法分析miR-224与LOX-1 3’UTR... 

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
主要缩略词语中英文索引
第1章 绪论
第2章 实验材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞及主要试剂
        2.1.2 实验仪器及耗材
        2.1.3 主要试剂配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 VSMCs复苏
        2.2.2 VSMCs传代培养
        2.2.3 VSMCs的冻存
        2.2.4 miR-224 mimics转染VSMCs
        2.2.5 PCSK9慢病毒转染VSMCs
        2.2.6 PCSK9 siRNA转染VSMCs
        2.2.7 提VSMCs蛋白
        2.2.8 Western blot
        2.2.9 油红O染色
        2.2.10 VSMCs摄取Dil-oxLDL观察
        2.2.11 细胞TC测定
        2.2.12 qRT-PCR
        2.2.13 统计分析
第3章 实验结果
    3.1 miR-224 在小鼠As斑块及ox LDL处理VSMCs中的表达
    3.2 miR-224 对ox LDL诱导的VSMCs脂质蓄积的影响
    3.3 miR-224 对VSMCs中LOX-1 表达的影响以及与LOX-13'UTR之间的靶向结合情况
    3.4 miR-224 候选靶基因 PCSK9对VSMCs中LOX-1 表达的影响
    3.5 miR-224 与 PCSK9 3'UTR 靶向结合情况
    3.6 miR-224 对VSMCs中PCSK9表达的影响
    3.7 PCSK9过表达对miR-224 抑制VSMCs中LOX-1 表达和脂质蓄积作用的影响
第4章 讨论
第5章 结论
参考文献
文献综述
    参考文献
硕士期间发表论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]microRNA调节细胞自噬影响动脉粥样硬化[J]. 刘亚密,曾召林,陈姣姣,陶军,王佐.  中国动脉硬化杂志. 2018(12)
[2]不要低估血管平滑肌细胞在动脉粥样硬化斑块形成中的作用[J]. 温进坤.  中国动脉硬化杂志. 2018(07)
[3]冠心病患者PCSK9和脂蛋白（a）水平与冠状动脉病变程度的相关性[J]. 李红艳.  中国动脉硬化杂志. 2016(06)



本文编号：3682760