内皮细胞mTORC1在血管舒张障碍及高血压中的功能与机制研究

发布时间：2022-11-11 19:47

　　高血压（Hypertension）是一种慢性疾病状态,其主要表现为动脉血压持续升高。高血压是冠状动脉疾病、中风、心力衰竭、房颤、外周血管疾病、视力丧失、慢性肾病和痴呆的主要危险因素。血管内皮细胞通过自分泌和旁分泌方式维持血流动态平衡以及血管张力稳定,因此血管内细胞功能障碍与高血压密切相关。雷帕霉素（rapamycin）哺乳动物雷帕霉素受体复合物1（mammalian target of rapamycin complex 1,mTORC1）抑制剂,临床上常用为免疫抑制药物。然而长期服用雷帕霉素导致存在导致患者动脉血压升高的风险。近年来研究发现,雷帕霉素通过抑制mTORC1活性导致血管内皮细胞功能紊乱,但是其具体的致病机制尚不明确。本研究的目的:一方面为临床上雷帕霉素用药提供理论基础,另一方面揭示mTORC1对于维持内皮细胞功能的重要作用。EC-Raptor^KD（内皮细胞特异性敲低Raptor）小鼠和Raptor^flox（野生型）小鼠分别给予血管紧张素Ⅱ（AngiotensinⅡ,AngⅡ）缓释泵4周,采用尾压法（Tail-cuff法）测量小鼠... 

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
缩略语
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
对象和方法
    1.1 实验试剂
        1.1.1 常用的化学试剂(均为市售分析纯试剂)
        1.1.2 细胞分离以及细胞培养相关试剂
        1.1.3 动物组织蛋白质提取和蛋白质印迹(Western Blotting)相关试剂
        1.1.4 抗体
        1.1.5 小分子干扰RNA技术
        1.1.6 液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)相关试剂
        1.1.7 其他试剂
    1.2 实验使用主要试剂配制
        1.2.1 分离人脐静脉内皮细胞(HUVECs)所需试剂的配制
        1.2.2 培养细胞需要试剂的配制
        1.2.3 Western Blotting相关试剂的配制
        1.2.4 小鼠基因鉴定相关试剂配制
        1.2.5 动脉环实验相关试剂的配置
    1.3 实验设备
    1.4 实验动物
        1.4.1 内皮细胞特异性敲低Raptor蛋白小鼠基因鉴定
        1.4.2 尾压法(Tail-cuff法)测量小鼠动脉血压
        1.4.3 内皮细胞特异性敲低Raptor蛋白小鼠动脉环实验
        1.4.4 小鼠组织样品的获取
        1.4.5 心脏组织HE染色
        1.4.6 小鼠血浆样品代谢组学分析样本的制备
        1.4.7 小鼠心功能检测
        1.4.8 代谢组学血浆样本LC-MS/MS的分析
    1.5 实验方法
        1.5.1 分离和培养原代HUVECs
        1.5.2 分离和培养小鼠肺原代内皮细胞的
        1.5.3 细胞蛋白质的提取与定量
        1.5.4 蛋白免疫印迹(Western Blotting)
        1.5.5 RNA干扰技术的方法
        1.5.6 超高压液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)检测AA代谢产物
    1.6 实验数据统计学分析
结果
    2.1 内皮特异性敲低mTORC1功能亚基Raptor导致内皮细胞功能障碍并上调动脉血压
        2.1.1 内皮细胞特异性敲低Raptor突变小鼠模型构建
        2.1.2 内皮细胞特异性敲低Raptor突变小鼠模型鉴定
        2.1.3 内皮细胞特异性敲低Raptor导致小鼠动脉血压升高
        2.1.4 内皮细胞特异性敲低Raptor蛋白导致心脏功能障碍
        2.1.5 内皮细胞特异性敲低Raptor蛋白导致内皮细胞依赖的舒张障碍
        2.1.6 内皮细胞特异性敲低Raptor蛋白通过调节COX代谢通路影响血管内皮依赖的舒张作用
    2.2 内皮特异性敲低mTORC1功能亚基Raptor诱导内皮细胞AA代谢产物改变
        2.2.1 EC-RaptorKD模型小鼠COX通路代谢产物发生改变
        2.2.2 mTORC1对HUVECsAA代谢的影响
讨论
    3.1 mTORC1参与动脉血压升高的发病过程
    3.2 mTORC1介导COX-2代谢途径影响动脉血压
    3.3 mTORC1调节PGE2的合成
    3.4 展望
结论
    一：ECmTORC1功能障碍导致EC依赖的舒张障碍诱导小鼠动脉血压升高
    二：ECmTORC1功能障碍降低COX-2代谢通路PGE2的含量
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述 mTOR信号通路及其在心血管疾病中的研究
    综述参考文献
致谢
个人简历



本文编号：3705635