lncRNA XXYLT1-AS2通过靶向RNA结合蛋白FUS调控内皮细胞的增殖迁移和黏附

发布时间：2023-03-12 18:47

　　目的本研究旨在探究lncRNA XXYLT1-AS2(XXYLT1-AS2)在动脉粥样硬化内皮功能障碍中作用和机制,探索其作为动脉粥样硬化临床靶向治疗靶点的潜在可能性。方法(1)使用生物信息学方法分析GEO数据库,获取差异性表达的基因,构建颈动脉球囊损伤大鼠模型,通过逆转录-聚合酶链反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)、实时荧光定量PCR分析(RealTime Quantitative PCR,RT-qPCR)鉴定目的基因XXYLT1-AS2的物种保守性,检测在细胞系和大鼠球囊损伤模型颈动脉中的表达;(2)构建XXYLT1-AS2过表达物及抑制物,使用CCK8、EdU和细胞划痕的实验方法细胞水平检测lncRNA对人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)增殖和迁移的影响;(3)通过Western blot、单核细胞黏附实验和RT-qPCR等方法检测在肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)炎性刺激下XXYLT...

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
引言
1 材料与方法
    1.1 实验仪器与设备
    1.2 实验耗材与试剂
    1.3 实验试剂配制
        1.3.1 配制DMEM-F12培养基
        1.3.2 配制DMEM-1640培养基
        1.3.3 配制胰蛋白酶
        1.3.4 配制PBS缓冲液
        1.3.5 配制DEPC水
        1.3.6 配制Western blot有关的缓冲液
        1.3.7 蛋白电泳浓缩胶 5%聚丙烯酰胺凝胶(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)
        1.3.8 蛋白电泳分离胶 12% PAGE 配制如表 1.2 所示。
        1.3.9 配制FISH实验相关试剂
    1.4 颈动脉球囊损伤模型大鼠培养
    1.5 临床样本的获取
    1.6 数据集分析
    1.7 细胞培养与转染
        1.7.1 细胞复苏
        1.7.2 细胞培养与传代
        1.7.3 细胞转染
    1.8 RNA提取和测定
    1.9 RNA逆转录和RT-q PCR
        1.9.1 RNA逆转录
        1.9.2 荧光实时定量PCR(RT-q PCR)反应
    1.10 蛋白提取及Western blot
        1.10.1 蛋白提取
        1.10.2 BCA法测定细胞蛋白浓度
        1.10.3 Western blot实验
    1.11 CCK8细胞增殖实验
    1.12 EDU细胞增殖实验
    1.13 细胞划痕实验
    1.14 单核细胞黏附实验
    1.15 免疫荧光实验
    1.16 荧光原位杂交(FISH)实验
    1.17 下游靶蛋白预测
    1.18 RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验
    1.19 RNA pull-down实验
    1.20 质粒的鉴定和提取
        1.20.1 质粒的鉴定
        1.20.2 质粒的提取
    1.21 免疫组化实验
    1.22 统计学方法
2 实验结果
    2.1 lnc RNA-XXYLT1-AS2 的鉴别和特征
    2.2 XXYLT1-AS2 抑制脐静脉内皮细胞的增殖和迁移
    2.3 XXYLT1-AS2 抑制炎症因子的表达和AKT/ NF-κB通路
    2.4 XXYLT1-AS2靶向结合RNA结合蛋白FUS
    2.5 FUS参与调控内皮细胞的增殖、迁移和粘附
    2.6 病理条件下,XXYLT1-AS2 通过靶向FUS调控细胞的增殖和迁移
    2.7 动脉粥样硬化和颈动脉球囊损伤大鼠XXYLT1-AS2和FUS表达降低
    2.8 XXYLT1-AS2 参与动脉粥样硬化过程的潜在调控示意图
3 讨论
结论
参考文献
综述
    综述参考文献
攻读学位期间的研究成果
缩略词表(附录)
致谢



本文编号：3761755