肥厚型心肌病相关线粒体16S rRNA 2336TC新突变鉴定及其致病机制研究

发布时间：2023-03-23 05:14

　　肥厚型心肌病(Hypertrophic cardiomyopathy, HCM)是一种以左心室及室间隔不对称肥厚为基本特征的原发性心肌病,其发病率约为0.2%,是青少年及运动员心源性猝死(SCD)的主要原因。 本研究筛选到一个具有母系遗传特征的肥厚型心肌病家系。该家系所有母系成员(4/4)均患病,二维超声心动图(ECHO)检测显示其最大左心室壁厚度(MLVWT)从26.8mm至46.6mm,室间隔厚度／左心室后壁厚度(IVS/LPW)从2.86到3.99,具有典型的肥厚型心肌病特征。该家系母系成员同时伴有完全性房室传导阻滞(AVB),先证者还出现左心室重构,导致肥厚型心肌病向扩张型心肌病(DCM)转化。 通过对该家系母系成员的线粒体DNA (mitochondrial DNA, mtDNA)进行全序列PCR扩增并测序,发现了一个新的16SrRNA2336T>C突变该突变进化保守性指数高达94.1%,不存在于2704个对照个体(http://www.genpat.uu.se/mtDB)和350个正常汉族人群中。2336T>C突变破坏了16SrRNA第Ⅲ结构域茎环结构处的233...

【文章页数】：118 页

【学位级别】：博士

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致谢
摘要
Abstract
第一章 文献综述：肥厚型心肌病(HCM)研究进展
    1.1 引言
    1.2 HCM的临床症状和形态学特征
    1.3 HCM的流行病学特征
    1.4 HCM的分子遗传学基础
        1.4.1 HCM相关的核基因突变及其致病机理
        1.4.2 HCM相关的mtDNA突变及其致病机理
        1.4.3 HCM相关的修饰基因突变及其致病机理
    1.5 HCM的诊断与治疗
        1.5.1 HCM的诊断
        1.5.2 HCM的治疗
    1.6 结语与展望
第二章 母系遗传性HCM家系的收集与临床分析
    2.1 引言
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验样品
        2.2.2 主要仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 临床检查
        2.3.2 HCM患者家族遗传史的调查
    2.4 实验结果
        2.4.1 母系遗传性HCM家系的收集
        2.4.2 临床表型分析
    2.5 讨论
        2.5.1 该家系具有典型的HCM临床表型
        2.5.2 AVB与HCM的遗传相关性
第三章 母系遗传性HCM相关线粒体DNA突变的筛查与分析
    3.1 引言
    3.2 实验材料
        3.2.1 实验样品
        3.2.2 实验仪器及耗材
    3.3 实验方法
        3.3.1 外周血采集
        3.3.2 外周血DNA提取
        3.3.3 mtDNA全序列PCR-测序
        3.3.4 毛囊细胞DNA的提取
        3.3.5 腔上皮细胞DNA的提取
        3.3.6 尿液细胞DNA的提取
        3.3.7 不同组织细胞中mtDNA突变的异质性分析
        3.3.8 HCM相关核基因突变的筛查
    3.4 实验结果
        3.4.1 母系遗传性HCM相关mtDNA突变的筛查
C突变在正常汉族人群中发生频率的分析">        3.4.2 2336T>C突变在正常汉族人群中发生频率的分析
C突变的异质性分析">        3.4.3 不同组织细胞中2336T>C突变的异质性分析
C突变对16S rRNA级结构的影响">        3.4.4 2336T>C突变对16S rRNA级结构的影响
        3.4.5 HCM相关核基因突变的筛查
    3.5 讨论
C突变对线粒体结构和功能的影响">第四章 16S rRNA2336T>C突变对线粒体结构和功能的影响
    4.1 引言
    4.2 实验材料
        4.2.1 实验样品
        4.2.2 实验仪器及耗材
    4.3 实验方法
        4.3.1 永生化淋巴细胞系的构建
        4.3.2 细胞倍增时间的测定
        4.3.3 细胞氧呼吸速率(OCR)的测定
        4.3.4 细胞ATP合成的测定
        4.3.5 细胞活性氧(ROS)产生的测定
        4.3.6 线粒体结构的电子显微镜观察
    4.4 实验结果
        4.4.1 患者特异性淋巴细胞系的构建
C突变对细胞倍增时间的影响">        4.4.2 2336T>C突变对细胞倍增时间的影响
C突变对线粒体氧消耗速率(OCR)的影响">        4.4.3 2336T>C突变对线粒体氧消耗速率(OCR)的影响
C突变对线粒体ATP合成的影响">        4.4.4 2336T>C突变对线粒体ATP合成的影响
C突变对活性氧(ROS)产生的影响">        4.4.5 2336T>C突变对活性氧(ROS)产生的影响
C突变对线粒体结构的影响">        4.4.6 2336T>C突变对线粒体结构的影响
    4.5 讨论
C突变对线粒体基因表达的影响">第五章 16S rRNA2336T>C突变对线粒体基因表达的影响
    5.1 引言
    5.2 实验材料
        5.2.1 实验样品
        5.2.2 实验仪器及耗材
    5.3 实验方法
        5.3.1 mtDNA拷贝数的分析
        5.3.2 线粒体核糖体RNA和核糖体结合蛋白转录水平分析
        5.3.3 细胞总蛋白的提取及定量
        5.3.4 线粒体的分离与纯化
        5.3.5 线粒体蛋白质的SDS-PAGE/Western blot分析
    5.4 实验结果
C突变对mtDNA拷贝数的影响">        5.4.1 2336T>C突变对mtDNA拷贝数的影响
C突变对线粒体16S rRNA转录水平的影响">        5.4.2 2336T>C突变对线粒体16S rRNA转录水平的影响
C突变对线粒体外膜蛋白表达的影响">        5.4.3 2336T>C突变对线粒体外膜蛋白表达的影响
C对mtDNA编码OXPHOS复合体亚基蛋白表达的影响">        5.4.4 2336T>C对mtDNA编码OXPHOS复合体亚基蛋白表达的影响
C对核基因编码OXPHOS复合体亚基蛋白表达的影响">        5.4.5 2336T>C对核基因编码OXPHOS复合体亚基蛋白表达的影响
C突变对线粒体核糖体大亚基结合蛋白基因表达的影响">        5.4.6 2336T>C突变对线粒体核糖体大亚基结合蛋白基因表达的影响
    5.5 讨论
第六章 论文创新性
第七章 存在问题与展望
参考文献
附录Ⅰ：主要试剂的配制方法
附录Ⅱ：常用英文缩写
附录Ⅲ：个人简历



本文编号：3768356