DFMG干预TLR4信号通路对内皮小管形成的影响

发布时间：2023-04-10 18:20

　　目的:研究7-二氟甲氧基-5,4’-二甲氧基金雀异黄素(7-difluorome-thoxy-5,4’-dimethoxygenistein,DFMG)对 LPC 处理人脐静脉内皮细胞(HUVE-12)内皮小管形成和调节Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)信号通路对内皮小管形成的影响。方法:1、用不同浓度(0、10、20、30、40 μM)的溶血性磷脂酰胆碱(Lysophosphatidylcholine,LPC)对 HUVE-12 进行处理,通过 CCK-8法检测细胞增殖活性,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒测上清中LDH的含量,划痕实验检测LPC对内皮细胞迁移的影响,Western blotting检测TLR4、VEGF蛋白表达,以得到最适的LPC处理浓度。用最适浓度的LPC处理HUVE-12制备氧化损伤细胞模型。2、用30 μM LPC对HUVE-12进行造模。分别用不同剂量的DFMG(0.3、3.0μM)预孵育 HUVE-12 30min 后,再用 LPC 处理,通过CCK-8法检测细胞增殖活性,LDH试剂盒测上清中LDH的含量,qPCR检测TLR4...

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
第一部分 LPC诱导的HUVE-12损伤模型的制备
    1.1 材料与试剂
        1.1.1 细胞系
        1.1.2 试剂与耗材
        1.1.3 主要试剂的配制
        1.1.4 仪器设备
    1.2 实验方法
        1.2.1 HUVE-12培养
        1.2.2 实验分组
        1.2.3 CCK-8试剂盒检测LPC对HUVE-12增殖的影响
        1.2.4 LDH试剂盒测LPC损伤HUVE-12上清中LDH含量
        1.2.5 划痕实验测LPC对HUVE-12迁移的影响
        1.2.6 Western Blot检测 LPC对HUVE-12 TLR4，VEGF蛋白的影响
        1.2.7 统计学分析
    1.3 结果
        1.3.1 LPC抑制HUVE-12增殖
        1.3.2 LPC促进HUVE-12 LDH分泌
        1.3.3 LPC促进HUVE-12迁移
        1.3.4 LPC上调HUVE-12 TLR4、VEGF蛋白表达
    1.4 讨论
    1.5 小结
第二部分 DFMG对LPC诱导的HUVE-12内皮小管形成的影响
    2.1 材料与试剂
        2.1.1 细胞系
        2.1.2 药品与试剂
        2.1.3 主要试剂的配制
        2.1.4 仪器与设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 实验分组
        2.2.3 条件培养基的配制
        2.2.4 CCK-8试剂盒测DFMG对LPC诱导的HUVE-12增殖的影响
        2.2.5 LDH试剂盒测DFMG对LPC诱导的HUVE-12 LDH的影响
        2.2.6 划痕法检测DFMG对LPC诱导的HUVE-12迁移的影响
        2.2.7 Matrigel基质胶血管形成试验检测DFMG对LPC诱导的HUVE-12内皮小管形成的影响
        2.2.8 qPCR测DFMG对LPC诱导的HUVE-12 TLR4、VEGF mRNA的影响
        2.2.9 Western Blot检测DFMG对LPC诱导的HUVE-12 TLR4、VEGF蛋白的影响
        2.2.10 统计学分析
    2.3 结果
        2.3.1 DFMG对LPC诱导的HUVE-12增殖的影响
        2.3.2 DFMG对LPC诱导的HUVE-12 LDH分泌的影响
        2.3.3 DFMG对LPC诱导的HUVE-12迁移的影响
        2.3.4 DFMG对LPC诱导的HUVE-12内皮小管形成的影响
        2.3.5 DFMG对LPC诱导的HUVE-12 TLR4、VEGF mRNA的影响
        2.3.6 DFMG对LPC诱导的HUVE-12 TLR4、VEGF蛋白的影响
    2.4 讨论
    2.5 小结
第三部分 DFMG干预TLR4信号通路对LPC诱导的HUVE-12内皮小管形成的影响
    3.1 材料与试剂
        3.1.1 药品与试剂
        3.1.2 病毒载体
        3.1.3 引物
        3.1.4 主要试剂的配制
        3.1.5 仪器与设备
    3.2 实验方法
        3.2.1 细胞培养
        3.2.2 TLR4慢病毒感染HUVE-12及稳定细胞系的筛选
        3.2.3 qPCR检测稳定细胞系中TLR4的表达
        3.2.4 qPCR检测DFMG干预TLR4信号通路对LPC诱导的HUVE-12VEGF mRNA的影响
        3.2.5 Matrigel基质胶内皮小管形成试验检测DFMG干预TLR4信号通路对LPC诱导的HUVE-12 VEGF内皮小管形成的影响
        3.2.6 数据统计分析
    3.3 结果
        3.3.1 筛选稳定TLR4过表达及TLR4抑制表达的HUVE-12系
        3.3.2 qPCR检测稳定感染细胞系中TLR4表达
        3.3.3 DFMG干预TLR4信号通路对LPC诱导的HUVE-12血管形成的影响
    3.4 讨论
    3.5 小结
结论
参考文献
综述
    参考文献
英文缩写略词索引
攻读硕士学位期间的主要成果
致谢



本文编号：3788602