过表达CIAPIN1对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响

发布时间：2023-06-02 20:53

　　目的:检测细胞因子诱导的凋亡抑制因子1(cytokine induced apoptosis inhibitor 1,CIAPIN1)过表达对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的影响。方法:1.构建CIAPIN1过表达重组慢病毒载体并建立其稳定转染H9c2心肌细胞株通过构建包装CIAPIN1过表达慢病毒载体,测定其滴度,将其转染H9c2细胞,检测转染效率。提取总蛋白,Western Blot检测CIAPIN1蛋白的表达,判定稳定转染细胞系是否构建成功。2.CIAPIN1过表达对H9c2心肌细胞H/R损伤的影响实验分组:CIAPIN1过表达阴性对照组(NC),CIAPIN1过表达阴性对照缺氧/复氧组(NC+H/R)和CIAPIN1过表达缺氧/复氧组(CIAPIN1+H/R)。NC+H/R组和CIAPIN1+H/R组细胞经历缺氧4 h/复氧2 h。应用MTT法检测H9c2细胞存活率,利用比色法来检测细胞的上清液内乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的活性;Hoechst 33258染色液从形态学角度观察细胞的凋亡...

【文章页数】：88 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
缩略语
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
一、CIAPIN1过表达慢病毒载体制备、包装及其稳定转染H9c2细胞株的建立
    1.1 实验材料
        1.1.1 慢病毒载体系统
        1.1.2 主要实验菌株和试剂
        1.1.3 主要仪器和设备
    1.2 实验方法
        1.2.1 主要溶液的配制
        1.2.2 制备及鉴定过表达慢病毒载体
        1.2.3 慢病毒包装
        1.2.4 H9c2细胞的培养
        1.2.5 CIAPIN1过表达重组慢病毒载体转染H9c2细胞
        1.2.6 Western Blot检测慢病毒转染的H9c2细胞中CIAPIN1蛋白表达
        1.2.7 数据处理
    1.3 结果
        1.3.1 GV358-CIAPIN1过表达慢病毒阳性克隆鉴定
        1.3.2 CIAPIN1过表达慢病毒包装
        1.3.3 CIAPIN1过表达慢病毒转染H9c2细胞效率鉴定
        1.3.4 CIAPIN1过表达慢病毒稳定转染H9c2细胞系鉴定
    1.4 讨论
    1.5 小结
二、CIAPIN1过表达对H9c2细胞H/R损伤的影响
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞
        2.1.2 主要器材
        2.1.3 药品与试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 主要溶液的配制
        2.2.2 稳定转染H9c2细胞H/R模型的建立
        2.2.3 实验分组
        2.2.4 MTT法检测细胞存活率
        2.2.5 细胞培养液中LDH活性测定
        2.2.6 Hoechst 33258染色
        2.2.7 流式细胞术检测细胞凋亡
        2.2.8 数据处理
    2.3 结果
        2.3.1 细胞存活率
        2.3.2 细胞培养液中LDH活性
        2.3.3 Hoechst33258染色
        2.3.4 流式细胞术测定凋亡情况
    2.4 讨论
    2.5 小结
结论
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述 新基因CIAPIN1的研究进展
    综述参考文献
致谢
个人简历



本文编号：3828024