TRPC1/STIM1复合体调节人脐静脉内皮细胞钙池操纵性钙通道和受体操纵性钙通道介导的钙内流和NO生成

发布时间：2023-06-03 03:15

　　目的研究瞬时受体电位通道1(TRPC1)/基质交联分子1(STIM1)复合体在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)钙池操纵性钙通道(SOCC)和受体操纵性钙通道(ROCC)介导的钙内流和NO生成中的作用。方法取2³代HUVEC,将构建的TRPC1和STIM1干扰质粒分别转染HUVEC,观察细胞转染效果的同时采用real-time PCR和Western blot检测TRPC1、STIM1 mRNA和蛋白的表达。将细胞分别与钙敏感受体(CaR)激动剂精胺、ROCC模拟剂(TPA)+CaR负性变构调节剂Calhex231、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro31-8220及经典型PKCs和PKCμ抑制剂Go6967孵育后,用荧光探针Fura-2/AM及DAF-FM负载方法同步检测[Ca2+]i和NO生成的变化;随后用TRPC1和STIM1干扰质粒同时转染HUVEC,与精胺孵育后检测[Ca2+]i和NO生成,免疫共沉淀法检测TRPC1和STIM1的相互作用。结果与Control组相比,TRPC1转染组和STIM1转染组TRPC1、STIM1 mRNA和蛋白表达均明显降低(P<...

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 实验材料
    1.2 主要试剂
    1.3 HUVEC的培养与鉴定
    1.4 基因的shRNA构建及转染
    1.5 real-time PCR检测HUVEC中TRPC1、STIM1mRNA的表达
    1.6 免疫印迹法检测HUVEC中TRPC1、STIM1的蛋白表达
    1.7 HUVEC中Ca2+浓度的测定
    1.8 HUVEC中NO含量的检测
    1.9 免疫共沉淀检测HUVEC中TRPC1、STIM1的相互作用
    1.1 0 统计学分析
2 结果
    2.1 shRNA转染HUVEC及HUVEC中TRPC1、STIM1 mRNA的表达
    2.2 HUVEC中TRPC1、STIM1的蛋白表达
    2.3 TRPC1基因沉默对SOCC和ROCC通路介导的[Ca2+]i和NO生成的作用
    2.4 STIM1基因沉默对SOCC和ROCC通路介导的[Ca2+]i和NO生成的作用
    2.5 TRPC1、STIM1基因同时沉默对HUVEC中[Ca2+]i和NO生成的影响
    2.6 HUVEC中TRPC1与STIM1的相互作用
3 讨论



本文编号：3828554