NADPH氧化酶-2在钙化性主动脉瓣膜疾病中的作用研究

发布时间：2024-02-03 12:50

　　背景:钙化性主动脉瓣疾病(Calcific aortic valve disease,CAVD)是继冠心病和高血压之后的第三大心血管疾病,但临床缺乏有效防治药物,因此有必要开展CAVD发病机制研究以寻找早期干预方法。活性氧(Reactive oxygen species,ROS)参与CAVD,但ROS的来源及其对钙化的调控作用需深入研究。NADPH氧化酶-2(NADPH oxidase-2,Nox2)是重要ROS来源,参与多种心血管疾病的发生和发展,然而Nox2在CAVD中作用尚不清楚,甚至缺乏关于Nox在正常主动脉瓣膜组织细胞表达的基本了解。目的:1阐明Nox主要亚型Nox2和Nox4在猪主动脉瓣膜组织和细胞的生理性表达;2检测Nox2在离体瓣膜间质细胞钙化过程和在体兔CAVD瓣膜中的水平变化;3明确Nox2抑制剂雷公藤红素对体外细胞钙化的影响和在体兔CAVD的保护作用。方法:1分离培养原代猪主动脉瓣膜间质细胞(Aortic valvular interstitial cells,AVIC)和内皮细胞(Endothelial cells,EC),分别利用RT-PCR、Western ...

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1.1β-actin、Nox2、Nox4、OPN扩增曲线和溶解曲线

图1.1β-actin、Nox2、Nox4、OPN扩增曲线和溶解曲线1.2.3Westernblot1.2.3.1细胞和组织裂解液的制备1.2.3.1.1细胞裂解（1）培养的细胞经预冷的PBS漂洗2次，裂解液中加入蛋白酶和磷酸酶抑制剂；（2）吸尽PBS，加入预....

图1.2蛋白标准曲线

浓度的测定：准蛋白：BCA试剂按A液:B液50:1的比例配制适量B准备六个1.5mlEP管，前五个加入40μlddH2O，向白溶液，混匀后取一半加入下一个EP管中，重复配，依次为2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg测样品....

图2.4Nox2和Nox4在主动脉瓣膜细胞的免疫荧光染色

新乡医学院硕士学位论文图2.3Nox2和Nox4在培养的EC和VIC中的表达。A：Nox2和Nox4mRNA水平，**P＜0.01vVIC，n=6/组；BandC：Nox4和Nox2蛋白水平，n=3/组。*P＜0.05。05101520mRNAleve....

图2.5培养的VIC钙化过程中Nox2的蛋白水平变化

新乡医学院硕士学位论文白水平标识物如骨桥蛋白（Osteopontin，OPN）及钙化关键信号分子如Runx表达水平显著高于对照组（P＜0.05）（图2.5B），说明体外培养的VIC钙型稳定可靠。有意义的是，随着钙化的进展，特别是从钙化第7天开始，Nox含量在VIC....

本文编号：3894219