Hes1与Akt/Stat3相互整合在缺血后适应中的心肌保护作用

发布时间：2024-03-20 18:40

　　目的： 明确Hes1在心肌缺血后适应中的保护作用，探讨其内源性心肌保护作用的分子机制。 方法： 构建Hes1基因表达(Ad-Hes1)和干扰(Ad-Hes1-shRNA)重组腺病毒载体，Sprague-Dawley (SD)大鼠心肌细胞原代培养，分别感染Ad-Hes1及Ad-Hes1-shRNA，建立心肌缺血/再灌注(H/R)、缺血后适应模型(IPost)体外模型，按实验分为六组：对照组(Control)、空载组(Mock)、缺血再灌注组(H/R)、缺血再灌注Hes1表达组(H/R+Hes1)、缺血后适应组(IPost)、缺血后适应Hes1干扰组(IPost+Hes1-shRNA)。检测各组细胞活力、凋亡、活性氧及线粒体膜电位，Westernblottingting检测Hes1、PTEN、Akt/p-Akt、Stat3/p-Stat3、GSK-3β/p-GSK-3β。 结果： 心肌细胞缺氧性损伤时，Hes1表达显著增高。Hes1的表达增高后可显著提高H/R组细胞的活力，稳定细胞线粒体膜电位，抑制胞质内的ROS生成，下调PTEN的表达，上调p-Akt、p-GSK-3β、p-Stat3表达...

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
中英文缩略词表
第1章 引言
第2章 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 细胞及菌株
        2.1.2 腺病毒载体系统
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 主要仪器
    2.2 重组腺病毒的构建
        2.2.1 Ad-Hes1 腺病毒载体构建
        2.2.2 Hes1 干扰片段腺病毒载体构建
        2.2.3 重组腺病毒 Ad-Hes1 及 Ad-Hes1-shRNA 的扩增与纯化
        2.2.4 重组腺病毒滴度测定（TCID50 法）
        2.2.5 重组腺病毒 Ad-Hes1 在转染细胞后表达验证
        2.2.6 重组腺病毒 Ad-Hes1-shRNA 干扰质粒的筛选
    2.3 实验方法
        2.3.1 SD(Sprague Dawley)大鼠原代心肌细胞的培养
        2.3.2 实验分组
        2.3.3 SD 大鼠原代心肌细胞腺病毒感染
        2.3.4 气体混配器调配
        2.3.5 H/R、IPost 体外模型液体配置成分表
        2.3.6 H/R、IPost 体外模型构建
        2.3.7 细胞增殖活性的检测
        2.3.8 细胞凋亡率的检测
        2.3.9 细胞内活性氧（ROS）检测
        2.3.10 △Ψm 的检测
        2.3.11 Western blotting 检测
        2.3.12 统计学分析
第3章 结果
    3.1 Ad-Hes1 及 Ad-Hes1-shRNA 在原代心肌细胞中的作用
        3.1.1 腺病毒载体在心肌细胞最佳 MOI 的确定
        3.1.2 Ad-Hes1 在原代心肌细胞中的正常表达
        3.1.3 Ad-Hes1-shRNA 在原代心肌细胞内的干扰作用
    3.2 Hes1 在体各组外心肌细胞模型中的表达
    3.3 Hes1 表达量增加提高缺血后心肌细胞活力
    3.4 Hes1 表达量增加降低缺血后心肌细胞凋亡
    3.5 Hes1 表达量升高减少缺血后心肌细胞内 ROS 形成
    3.6 Hes1 表达量增加可稳定缺血后心肌细胞△Ψm
    3.7 Hes1 激活 PI3K/Akt 信号通路
    3.8 Hes1 激活 JAK/Stat3 信号通路
第4章 讨论
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：3933133