抗衰老Klotho蛋白对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用及其机制

发布时间：2024-05-19 08:58

　　目的研究抗衰老Klotho蛋白对过氧化氢(H2O2)氧化损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的影响及其作用机制。方法用H2O2诱导HUVEC构建氧化损伤模型。将HUVEC设置对照组、H2O2损伤组、不同浓度(1、10、100μg/L)Klotho蛋白组、丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)作用组。噻唑蓝法检测细胞存活率;特定试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量;酶联免疫吸附法检测一氧化氮(NO)、内皮素1(ET-1)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)、核因子κB(NF-κB)的含量;SA-β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况;流式细胞术检测活性氧(ROS)和细胞凋亡;Western blot检测Bcl-2、Bax、NF-κB p65及p-AKT的表达变化。结果与对照组相比,H2O2损伤组细胞存活率显著下降,LDH、MDA含量显著增加,SOD、GSH活性显著下降,NO含量下降,ET-1、ICAM-1、VCAM-1、NF-κB、细胞衰老率、ROS含量和细胞凋亡率显著增加,Bax蛋白表达上升而B...

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

图1．Klotho蛋白对H2O2氧化损伤后HUVEC存活率的影响(n=6)A为对照组，B为H2O2损伤组，C为1μg/LKlotho

蔅p65及β-actin一抗，4℃过夜。TBST洗涤3次，室温孵育山羊抗兔IgG二抗2h。孵育结束后TSBT洗涤3次，利用ECL化学发光法显影检测。QuantityOne软件分析各目的蛋白的相对表达量。1．8统计学分析所有数据采用SPSS17．0进行统计分析，数据用x±s表示。在....

图5．Klotho蛋白对H2O2氧化损伤后HUVEC蛋白表达的影响(n=6)A为Westernblot检测蛋白表达;B为蛋白相对表达的统计图

作为强氧化剂，可使血管内皮细胞引发脂质过氧化反应，造成细胞氧化损伤，进而促进As的发生和发展［5］。因此，研究减轻血管内皮细胞氧化损伤对于防治As具有重要应用价值。最新研究表明，抗衰老Klotho蛋白在动物体内的缺失会导致各种类似衰老的表现如As、寿命减短、器官萎缩、能量代谢异常....

图1．Klotho蛋白对H2O2氧化损伤后HUVEC存活率的影响(n=6)A为对照组，B为H2O2损伤组，C为1μg/LKlotho

蔅p65及β-actin一抗，4℃过夜。TBST洗涤3次，室温孵育山羊抗兔IgG二抗2h。孵育结束后TSBT洗涤3次，利用ECL化学发光法显影检测。QuantityOne软件分析各目的蛋白的相对表达量。1．8统计学分析所有数据采用SPSS17．0进行统计分析，数据用x±s表示。在....

图5．Klotho蛋白对H2O2氧化损伤后HUVEC蛋白表达的影响(n=6)A为Westernblot检测蛋白表达;B为蛋白相对表达的统计图

作为强氧化剂，可使血管内皮细胞引发脂质过氧化反应，造成细胞氧化损伤，进而促进As的发生和发展［5］。因此，研究减轻血管内皮细胞氧化损伤对于防治As具有重要应用价值。最新研究表明，抗衰老Klotho蛋白在动物体内的缺失会导致各种类似衰老的表现如As、寿命减短、器官萎缩、能量代谢异常....

本文编号：3977888