人脐带间充质干细胞外泌体对阿霉素诱导的扩张型心肌病大鼠心肌微血管及心功能的影响

发布时间：2024-05-22 03:29

　　目的探讨通过尾静脉移植方式研究人脐带间充质干细胞外泌体对扩张型心肌病模型大鼠心肌微血管再生及心功能恢复的影响。方法1.构建扩张型心肌病(DCM)大鼠模型并鉴定采用六周龄左右的雄性SD大鼠140只,随机分为正常组对照组(n=20)和扩张型心肌病(Dilated cardiomyopathy,DCM)模型组(n=120)。DCM模型组大鼠采用每周腹腔注射阿霉素1.0mg/kg,每周2次,连续8周的方法构建DCM模型。注射药物1周后,行超声心动图来检测评价大鼠心功能,免疫组化标记心肌组织CD34,计算微血管密度,同时行心肌组织HE及Masson染色。2.人脐带间充质干细胞(human umbilical mesenchymal stem cells,hUCMSCs)外泌体(exosome)的提取及鉴定运用组织块法原代培养hUCMSCs,采用传代培养的第3代hUCMSCs行流式细胞仪鉴定干细胞表面标志物;收集3-5代的hUCMSCs无血清培养基,,试剂盒法提取外泌体;应用透射电子显微镜观察获取的外泌体(exosomes)形态;蛋白免疫印迹法(western blot)检测人脐带间充质干细胞(h...

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【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
引言
实验材料及方法
    1 实验材料
        1.1 实验动物
        1.2 脐带标本
        1.3 主要试剂
        1.4 主要设备
    2.实验步骤
        2.1 人脐带间充质干细胞的分离培养鉴定
            2.1.1 原代hUCMSCs的分离、培养及传代
            2.1.2 hUCMSCs 的鉴定
        2.2 hUCMSCs-exo的提取及鉴定
            2.2.1 hUCMSCs-exo的提取
            2.2.2 hUCMSCs-exo的鉴定
                2.2.2.1 透射电镜观察外泌体
                2.2.2.2 Western blot检测hUCMSCs-exo表面特异性标志蛋白CD81、CD9 的表达
                2.2.2.3 纳米颗粒跟踪分析技术鉴定外泌体
        2.3 DCM动物模型的建立及鉴定
        2.4 hUCMSCs-exo实验分组及各实验步骤
            2.4.1 DCM实验分组及hUCMSCs-exo干预处理
            2.4.2 检测干预后大鼠心肌微血管数量变化
            2.4.3 Western blot检测各组大鼠心肌组织VEGF-2 的表达
        2.5 实验结果分析
实验结果
    1 人脐带间充质干细胞的分离培养及鉴定
        1.1 hUCMSCs培养结果
        1.2 hUCMSCs 的鉴定
    2 hUCMSCs-exo 的鉴定结果
    3 SD大鼠 DCM 建模后的情况
        3.1 建模过程中正常组大鼠与DCM组大鼠生存率变化
        3.2 体质量变化
        3.3 DCM大鼠与正常组大鼠超声心动图结果比较
        3.4 HE及 Masson染色结果
    4 尾静脉注射hUCMSCs-exo对 DCM大鼠心肌微血管及心功能的影响
        4.1 尾静脉注射hUMSCs-exo后大鼠的一般情况
        4.2 hUCMSCs-exo移植后四组大鼠超声心动图的结果比较
        4.3 尾静脉注射外泌体后大鼠心肌组织微血管的表达
        4.4 蛋白水平VEGF-2在hUCMSCs-exo移植后各组大鼠心肌的表达状况
讨论
结论
参考文献
综述
    综述参考文献
攻读学位期间发表的论文
英文缩略词
致谢



本文编号：3980334