从巨噬细胞角度探讨SERCA2 C674失活与动脉粥样硬化形成的关系及相关机制

发布时间：2024-09-18 09:47

　　心血管疾病是全世界发病率和死亡率最高的疾病,在我国是第一死亡病因,动脉粥样硬化是其主要的病理基础,导致的常见疾病是脑卒中和冠心病。动脉粥样硬化是一种伴有斑块形成的慢性进展性疾病,主要累及大、中动脉。单核细胞和巨噬细胞是病变发展的关键因素,通过摄入脂质和分泌促炎因子等参与动脉粥样硬化斑块的进展。循环中的单核细胞在血管壁上的粘附增加是动脉粥样硬化病变过程中的早期表现,巨噬细胞是粥样斑块的主要成分。肌浆网/内质网钙ATP酶（sarco/endoplasmic reticulum calcium ATPase,SERCA）是细胞内调控钙循环和钙信号的关键酶,对维持细胞内钙稳态和内质网稳态至关重要。SERCA2是SERCA在心血管系统的主要亚型,对维持心血管稳态极其重要。位于SERCA2胞浆侧的674位半胱氨酸（cysteine 674,C674）上的巯基是其主要的谷胱甘肽化位点。生理情况下,C674可以被可逆性地谷胱甘肽化,增加SERCA2的活性进而舒张血管;在活性氧大量增加的病理情况下,C674巯基被不可逆性氧化（C674-SO₃H）,导致SERCA2的功能障碍。在动脉粥...

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

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缩略词对照表
1 绪论
    1.1 动脉粥样硬化发病机制
    1.2 巨噬细胞与动脉粥样硬化的关系
    1.3 肌浆网/内质网钙ATP酶(sarco/endoplasmic reticulum ATPase,SERCA)的组织分布及在心血管系统中的作用
        1.3.1 SERCA的结构与分布
        1.3.2 C674的氧化还原状态与动脉粥样硬化的关系
    1.4 内质网应激
        1.4.1 内质网应激与动脉粥样硬化的关系
        1.4.2 巨噬细胞内质网应激与动脉粥样硬化的关系
        1.4.3 巨噬细胞内质网应激与炎性因子和粘附分子的关系
    1.5 粘附分子与动脉粥样硬化的关系
2 本文的选题依据及研究内容
    2.1 研究目的
    2.2 研究内容
        2.2.1 C674的失活对高脂饮食诱导动脉粥样硬化的影响
        2.2.2 C674的失活对巨噬细胞内质网应激蛋白和炎性转录因子及粘附分子表达的影响
        2.2.3 Ox-LDL和ac-LDL是否促进C674的失活对巨噬细胞内质网应激相关蛋白及炎性因子和粘附分子表达的调控
        2.2.4 高脂饮食是否影响C674的失活对巨噬细胞内质网应激相关蛋白和炎性因子及粘附分子的表达
        2.2.5 4 -PBA和CDN1163对C674失活诱导的内质网应激及炎性因子和粘附分子表达的影响
    2.3 技术路线
        2.3.1 C674的失活对高脂饮食诱导动脉粥样硬化的影响
        2.3.2 C674的失活对巨噬细胞内质网应激蛋白和炎性转录因子及粘附分子表达的影响
        2.3.3 Ox-LDL和ac-LDL是否促进C674的失活对巨噬细胞内质网应激相关蛋白及炎性因子和粘附分子表达的调控
        2.3.4 高脂饮食是否影响C674的失活对巨噬细胞内质网应激相关蛋白及炎性因子和粘附分子的表达
        2.3.5 4 -PBA和CDN1163对C674失活诱导的内质网应激及炎性因子和粘附分子表达的影响
    2.4 本研究的创新点
3 实验方法、实验结果及讨论
    3.1 实验材料与仪器
        3.1.1 常用试剂与材料
        3.1.2 主要仪器
        3.1.3 主要实验试剂的配置
        3.1.4 实验动物和饲养条件
        3.1.5 实验组织
    3.2 实验方法介绍
        3.2.1 血清中甘油三酯和胆固醇的检测
        3.2.2 组织准备和制片
        3.2.3 染色分析
        3.2.4 巨噬细胞的培养
        3.2.5 免疫荧光染色方法
        3.2.6 荧光定量PCR
        3.2.7 Western blot测定细胞蛋白的表达
        3.2.8 骨髓衍生的巨噬细胞对内皮细胞的粘附实验
        3.2.9 Ox-LDL和ac-LDL在体外对巨噬细胞进行诱导刺激
        3.2.10 4 -PBA和CDN1163在体外对巨噬细胞进行干预
        3.2.11 统计学方法
    3.3 实验结果
        3.3.1 SKI/LDLR-/-小鼠和LDLR-/-小鼠的体重及血脂含量
        3.3.2 C674的失活加速高脂饮食诱导的动脉粥样硬化进程
        3.3.3 C674的失活增加巨噬细胞内质网应激相关蛋白的表达
        3.3.4 C674的失活增加巨噬细胞炎性转录因子和粘附分子的表达
        3.3.5 C674的失活增加巨噬细胞对内皮细胞的粘附
        3.3.6 Ox-LDL和ac-LDL促进C674失活诱导的巨噬细胞内质网应激相关蛋白的表达
        3.3.7 Ox-LDL和ac-LDL促进C674的失活诱导的巨噬细胞炎性因子和粘附分子的表达
        3.3.8 高脂饮食促进C674的失活对巨噬细胞内质网应激相关蛋白表达的影响
        3.3.9 高脂饮食促进C674的失活对巨噬细胞炎性因子和粘附分子表达的影响
        3.3.10 4 -PBA和CDN1163部分拮抗C674失活诱导的内质网应激及炎性因子和粘附分子的表达
    3.4 讨论
4 主要研究结论与展望
    4.1 主要研究结论
    4.2 后续工作展望
        4.2.1 后续工作
        4.2.2 展望
致谢
参考文献
附录
    A.作者在攻读学位期间发表的论文
    B.作者在攻读硕士学位期间参加的科研项目



本文编号：4005954